姜黃素抑制BLyS表達的分子機制及其在抗類風濕性關節(jié)炎中的作用.pdf

1、類風濕性關節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis，RA)是一常見的自身免疫性疾病，具有較高致殘率，嚴重影響患者的生活質量。RA的發(fā)病機制不僅涉及T淋巴細胞活化，而且與B 淋巴細胞過度活化與功能亢進有密切聯系，近年研究表明B 淋巴細胞在RA的防治中有重要作用。TNF家族的B 淋巴細胞刺激因子(B lymphocyte stimulator, BLyS)是主要表達于B 淋巴細胞的重要致炎細胞因子，其過表達與RA的發(fā)生和發(fā)展密切相關，

2、抑制BLyS表達或生物學活性的發(fā)揮，無疑有利于RA的防治。姜黃素(Curcumin)是姜黃色素中最重要的活性成分，研究表明，姜黃素具有抗炎、抗氧化、免疫調節(jié)等廣泛的藥理作用，在抗RA等自身免疫性疾病方面具有明顯的應用前景，但其發(fā)揮抗炎作用的分子機制尚未明了，特別是其抗RA的機制是否與調節(jié)BLyS 有關目前尚未見報道。為此，我們針對該問題進行了系列研究，探討了姜黃素對BLyS的調節(jié)作用及其在抗RA中的作用，結果表明，姜黃素可抑制基礎水平和

3、IFN-γ誘導的BLyS表達，而且在小鼠膠原誘導的關節(jié)炎(Collagen induced arthritis，CIA)模型中有抗炎作用并抑制體內的BLyS表達，“通過抑制BLyS表達而發(fā)揮抗炎作用”可能是姜黃素抗RA的一個新機制。
　　 第一部分姜黃素可抑制基礎水平BLyS的表達目的：以人B 淋巴細胞為模型，探討姜黃素對基礎水平BLyS表達的抑制作用，闡明該抑制作用的可能分子機制。
　　 方法及結果：
　　 1

4、.在人B 淋巴細胞Namalwa和Daudi中，經RT-PCR及Real-time PCR 證實姜黃素可抑制基礎水平BLyS mRNA的表達；經Western blot 證實姜黃素可抑制基礎水平BLyS蛋白的表達。
　　 2.構建了包含不同長度BLyS基因啟動子區(qū)熒光素酶(Luciferase，Luc)報告基因重組質粒，經Luc 報告基因檢測實驗證實，姜黃素可抑制基礎水平BLyS基因啟動子區(qū)的活性，且該抑制作用與-1082～-5

5、71區(qū)域密切相關。
　　 3.經電泳遷移阻滯實驗(Electrophoresis mobility shift，EMSA)實驗證實，NF-κ B能特異性結合于BLyS基因啟動子區(qū)?874～?858 序列，姜黃素呈時間依賴性和劑量依賴性抑制NF-κ B與該區(qū)域的結合。
　　 4.經染色質免疫沉淀(Chromatin immunoprecipitation assay，ChIP)實驗證實，姜黃素可在B 淋巴細胞內抑制NF-κ

6、 B的p65 亞基與BLyS基因啟動子區(qū)?874～?858 結合。
　　 5. 經激光共聚焦、Western blot 證實，姜黃素可抑制p65 核轉位及I κ B α的磷酸化。
　　 結論：在人B 淋巴細胞Namalwa和Daudi中，姜黃素可抑制基礎水平BLyS的表達，該抑制作用的可能機制是其抑制了NF-κ B信號通路。
　　 第二部分姜黃素對IFN-γ誘導BLyS表達的抑制作用目的：在人B 淋巴細胞細胞中，

7、探討姜黃素對IFN-γ誘導BLyS表達的抑制作用，闡明該抑制作用的可能分子機制。
　　 方法及結果：
　　 1.在B 淋巴細胞Namalwa和Daudi中，經RT-PCR、Real-time PCR及Western blot證實了姜黃素可抑制IFN-γ誘導的BLyS表達。
　　 2.Luc 報告基因檢測實驗證實，姜黃素可抑制IFN-γ誘導的BLyS基因啟動子區(qū)活性。
　　 3.經RT-PCR、Real-t

8、ime PCR及Western blot 證實，JAK2 抑制劑(AG 490)可阻斷IFN-γ對BLyS表達的誘導作用。
　　 4.經Western blot 證實，姜黃素可抑制IFN-γ誘導的STAT1磷酸化。
　　 結論：在人B 淋巴細胞中，姜黃素可抑制IFN-γ誘導BLyS的表達，該抑制作用是由于抑制了JAK2-STAT1信號通路。
　　 第三部分姜黃素在小鼠CIA 模型中抑制BLyS的表達及抗炎作用目的

9、：建立用于RA 研究的小鼠CIA 模型，并探討姜黃素在該動物模型上的抗炎作用以及抗炎過程中對BLyS表達的抑制作用，以揭示“通過抑制BLyS表達而發(fā)揮抗炎作用”是姜黃素抗RA的一個新機制。方法及結果：
　　 1.將牛Ⅱ型膠原經尾根部皮下注射于8周齡雄性DBA/1小鼠，制備小鼠Ⅱ型膠原誘導的關節(jié)炎(CIA)模型。
　　 2.以關節(jié)炎指數對小鼠模型的炎癥情況進行評分，證實了(1)姜黃素預處理后對CIA的炎癥有一定預防作用；(

10、2)在已建立的CIA 模型上，姜黃素處理對炎癥有治療作用。
　　 3.經ELISA 檢測小鼠血清中炎性細胞因子BLyS、IFN-γ、IL-6水平，證實了姜黃素抗炎過程中可抑制上述炎性細胞因子的水平。
　　 4.經RT-PCR及Western blot 證實了姜黃素在抗炎過程中可下調小鼠脾臟組織中BLyS的表達。
　　 結論：在小鼠CIA 模型中，姜黃素對關節(jié)炎的進程有預防及緩解作用，“通過抑制BLyS表達而發(fā)揮抗