氧化苦參堿抗類風濕性關節(jié)炎的作用及機制.pdf

1、目的：本研究以膠原誘導性關節(jié)炎（collagen-induced arthritis，CIA）大鼠模型為研究對象，以T淋巴細胞亞群Treg和Th17細胞的失衡為切入點，觀察氧化苦參堿對CIA大鼠關節(jié)腫脹度、關節(jié)評分和關節(jié)病理改變的影響。通過檢測血清IL-17A和TNF-α水平的變化及其對脾淋巴細胞Foxp3和RORγt mRNA和蛋白表達的影響，初步探討氧化苦參堿對類風濕性關節(jié)炎的治療作用及可能的免疫學分子機制，為其應用于類風濕性關節(jié)炎

2、的臨床治療提供理論基礎和實驗依據。
　　方法： SD大鼠60只，體重200±20g，隨機取10只作為正常組，其余50只為實驗組并隨機分為五組，分別為：模型組、陽性藥物組（地塞米松組）、氧化苦參堿高、中、低劑量組，每組10只。（1）構建CIA大鼠模型：實驗組50只SD大鼠分別構建CIA模型，于每只SD大鼠右足趾皮下注射牛II型膠原與完全弗氏完全佐劑的混合乳劑0.1mL，一周后二次免疫加強，第8天開始腹腔注射不同濃度的氧化苦參堿及地塞

3、米松進行治療。（2）HE染色觀察SD大鼠關節(jié)滑膜組織變化：治療43天后處死SD大鼠，取各組大鼠的膝關節(jié)和踝關節(jié)固定、包埋、切片后行HE染色，觀察關節(jié)組織中滑膜的增生和炎癥變化；（3）采用ELISA法檢測各組大鼠血清中IL-17A和TNF-α的水平變化；（4）運用RT-PCR技術測定各組SD大鼠脾細胞中Foxp3 mRNA和RORγt mRNA的水平；（5）采用Western-blot法檢測氧化苦參堿對各組SD大鼠脾細胞中Foxp3和RO

4、Rγt蛋白表達的影響。
　　結果：（1）氧化苦參堿可有效降低CIA大鼠的足爪腫脹程度和關節(jié)炎指數。（2）氧化苦參堿可明顯的減輕CIA大鼠關節(jié)滑膜的增生。（3）氧化苦參堿可顯著降低CIA大鼠血清中炎癥因子TNF-α和IL-17A的水平。（4）氧化苦參堿可抑制Th17細胞基因RORγt mRNA的水平而促進Terg細胞特異性基因Foxp3 mRNA的水平。（5）氧化苦參堿可抑制RORγt蛋白的表達而促進Foxp3蛋白的表達。