人類(lèi)心臟發(fā)育候選新基因hnulp1的克隆與功能研究.pdf

1、堿性螺旋-環(huán)-螺旋蛋白(basic helix-loop-helix，bHLH)是真核生物中的一種特殊的轉(zhuǎn)錄因子，它們?cè)谏窠?jīng)發(fā)生、肌細(xì)胞發(fā)生、心臟發(fā)育和血細(xì)胞發(fā)生、癌癥發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。hnu1p1就是本文作者在利用生物信息學(xué)方法篩選人類(lèi)心臟發(fā)育候選基因的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)人類(lèi)新基因。其cDNA全長(zhǎng)2270個(gè)堿基，ORF全長(zhǎng)2031個(gè)堿基，編碼一個(gè)長(zhǎng)676個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì)。該蛋白包含一個(gè)bHLH和一個(gè)功能未知命名為DUF

2、654的結(jié)構(gòu)域。在小鼠等物種中均發(fā)現(xiàn)了它的同源蛋白，并且它們之間具有極高的保守度，說(shuō)明此蛋白所在的亞家族可能具有相當(dāng)重要的功能。組織表達(dá)分析表明該基因在胚胎和成體中有不同的表達(dá)模式，且在成體心臟組織中有較高水平的表達(dá)。熒光素酶報(bào)道基因信號(hào)途徑分析表明，該蛋白作為一個(gè)轉(zhuǎn)錄抑制子對(duì)SRF信號(hào)途徑起著極強(qiáng)的抑制作用，并且該抑制作用通過(guò)新的未被鑒定功能的DUF654結(jié)構(gòu)域表現(xiàn)出來(lái)。這些結(jié)果預(yù)示著人類(lèi)bHLH轉(zhuǎn)錄因子HNULP1在心臟發(fā)育的晚期通

3、過(guò)SRF信號(hào)途徑對(duì)心臟發(fā)育起著重要的調(diào)控作用。
　　 同時(shí)，我們還通過(guò)酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)篩選到人類(lèi)心臟特異性表達(dá)基因FHL2作為HNULP1的相互作用侯選蛋白。隨后，我們通過(guò)免疫共沉淀技術(shù)證明了其在細(xì)胞內(nèi)的相互作用。熒光共定位實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明HNULP1與FHL2共定位于細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核中。熒光素酶報(bào)道基因分析表明FHL2對(duì)HNULP1的轉(zhuǎn)錄活性起到負(fù)調(diào)控作用。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步研究HNULP1在心臟發(fā)育中的功能，以及FHL2與HNULP