人類心臟發(fā)育候選基因AHNAK的表達與功能研究.pdf

1、湖南師范大學碩士學位論文人類心臟發(fā)育候選基因AHNAK的表達與功能研究姓名：李寧申請學位級別：碩士專業(yè)：遺傳學指導教師：李永青；吳秀山200805疫組化分析該基因的時空表達模式。首先選擇A H N A K f l 的C 端的特異堿基序列作為探針。胚胎原位雜交結果表明，該基因在小鼠胚胎中的心臟組織表達最強，在肌肉和腦的表達較強。其次利用抗體進行免疫組化分析，研究結果表明，A H N A K p 蛋白在心臟，肌肉和腦中表達，其中以心臟和腦表

2、達最為強烈。我們進一步利用新生小鼠原代心肌細胞檢測A H N A K p 蛋白在細胞中的分布狀況。免疫熒光實驗檢測結果表明A H N A K f l 蛋白定位于心肌細胞細胞質(zhì)中。進一步利用免疫電鏡技術觀察表明，該基因在心肌細胞中的肌絲和線粒體上大量表達。為了研究A H N A K I S 相互作用蛋白，我們通過酵母雙雜交技術，從成人心臟文庫中篩選并鑒定到8 個與A H N A K f l 發(fā)生相互作用的蛋白質(zhì)，其中T N N l 3 是

3、一個與心臟特異性表達的基因，它與家族性肥厚型心肌炎的發(fā)生有著密切的關系。為了進一步證明A H N A K p 和T N N l 3 是否發(fā)生相互作用，我們通過免疫共沉淀實驗進行驗證，結果證明a I - I N a K p 和T N N l 3 在體內(nèi)確實存在相互作用。上述結果表明A H N A K p 在小鼠心臟的各個發(fā)育階段中表達，提示它在心臟發(fā)育過程中可能起著一個重要的作用。這為以后深入地研究人類A H N A K ：，O 在心臟方