人類心臟發(fā)育候選基因AHNAK的表達(dá)與功能研究.pdf

1、湖南師范大學(xué)碩士學(xué)位論文人類心臟發(fā)育候選基因AHNAK的表達(dá)與功能研究姓名：李寧申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：李永青；吳秀山200805疫組化分析該基因的時(shí)空表達(dá)模式。首先選擇A H N A K f l 的C 端的特異堿基序列作為探針。胚胎原位雜交結(jié)果表明，該基因在小鼠胚胎中的心臟組織表達(dá)最強(qiáng)，在肌肉和腦的表達(dá)較強(qiáng)。其次利用抗體進(jìn)行免疫組化分析，研究結(jié)果表明，A H N A K p 蛋白在心臟，肌肉和腦中表達(dá)，其中以心臟和腦表

2、達(dá)最為強(qiáng)烈。我們進(jìn)一步利用新生小鼠原代心肌細(xì)胞檢測(cè)A H N A K p 蛋白在細(xì)胞中的分布狀況。免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果表明A H N A K f l 蛋白定位于心肌細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中。進(jìn)一步利用免疫電鏡技術(shù)觀察表明，該基因在心肌細(xì)胞中的肌絲和線粒體上大量表達(dá)。為了研究A H N A K I S 相互作用蛋白，我們通過酵母雙雜交技術(shù)，從成人心臟文庫中篩選并鑒定到8 個(gè)與A H N A K f l 發(fā)生相互作用的蛋白質(zhì)，其中T N N l 3 是

3、一個(gè)與心臟特異性表達(dá)的基因，它與家族性肥厚型心肌炎的發(fā)生有著密切的關(guān)系。為了進(jìn)一步證明A H N A K p 和T N N l 3 是否發(fā)生相互作用，我們通過免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果證明a I - I N a K p 和T N N l 3 在體內(nèi)確實(shí)存在相互作用。上述結(jié)果表明A H N A K p 在小鼠心臟的各個(gè)發(fā)育階段中表達(dá)，提示它在心臟發(fā)育過程中可能起著一個(gè)重要的作用。這為以后深入地研究人類A H N A K ：，O 在心臟方