肺癌相關(guān)新基因的克隆與篩選及新的候選原癌基因OLC1的功能研究.pdf

1、肺癌是嚴(yán)重危害人類健康的惡性腫瘤之一，在中國，肺癌的發(fā)病率逐年上升，現(xiàn)已居惡性腫瘤發(fā)病率的首位。在過去的十余年中，我們已經(jīng)對肺癌的分子遺傳學(xué)改變有了一定的認(rèn)識，然而，肺癌發(fā)生的確切機制仍然不清楚。 在本研究中，我們克隆了51個肺癌相關(guān)新基因，并對其進(jìn)行了功能和表型篩選。通過篩選，我們發(fā)現(xiàn)一個基因OLC1(overexpressedinlungcancer)，能在報告基因水平激活NF-kappaB通路，外源高表達(dá)能使NIH/3T3

2、細(xì)胞形成明顯的轉(zhuǎn)化集落。本研究將OLC1穩(wěn)定轉(zhuǎn)染NIH/3T3細(xì)胞，通過體內(nèi)外實驗評估其惡性轉(zhuǎn)化功能。用特異性針對OLC1的小干擾RNA(smallinterferingRNA，siRNA)沉默OLC1的表達(dá)，并以此評價OLC1在腫瘤細(xì)胞增殖生長中的作用。為了在蛋白水平檢測OLC1的表達(dá)，我們生產(chǎn)，純化，并鑒定了OLC1的多克隆抗體，用免疫組織化學(xué)染色結(jié)合組織微陣列技術(shù)檢測OLC1蛋白在肺癌和正常組織中的表達(dá)水平。本研究還用凝膠阻滯等方

3、法檢測OLC1對NF-kappaB通路的激活作用。 我們的研究結(jié)果顯示，OLC1的穩(wěn)定高表達(dá)能顯著加快NIH/3T3細(xì)胞的生長速度，使其失去接觸抑制，獲得在軟瓊脂中錨定非依賴性生長的能力；體內(nèi)實驗表明，高表達(dá)OLC1的NIH/3T3細(xì)胞能在裸鼠身上形成纖維肉瘤，而未轉(zhuǎn)染細(xì)胞和空載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞則不能形成；用特異性siRNA沉默OLC1在肺癌細(xì)胞系H520和H1299中的表達(dá)能引起生長抑制，并能在不需要其它附加凋亡誘導(dǎo)物的情況下引起細(xì)