蟲草棒束孢（Isaria farinosa）多糖的研究.pdf

1、本文從液體深層發(fā)酵產(chǎn)多糖條件的篩選、胞內(nèi)及胞外多糖的制備與分析和多糖的生物學(xué)活性三方面對(duì)IsariafarinosaB05菌株進(jìn)行了研究。 (1)液體深層發(fā)酵產(chǎn)多糖條件中，由單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)確定了IsariafarinosaB05菌株發(fā)酵最佳的培養(yǎng)基組成為：蔗糖3.5％(w/v)、蛋白胨0.5％、酵母臂0.2％、K2HPO40.1％、MgSO40.05％；由單因素實(shí)驗(yàn)確定了該菌株最佳的發(fā)酵條件為：初始pH7.0、溫度25℃、

2、裝液量75mL/250mL、接種量5％(v/v)、培養(yǎng)時(shí)間5d；在最佳的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下，該菌株最大的生物量達(dá)2.12g/100mL，產(chǎn)水溶性胞外多糖可高達(dá)2.14g/L。 (2)確定了胞外多糖的最佳提取工藝為發(fā)酵液在70℃下濃縮至原來的1/7，然后調(diào)pH7.0，加入3倍乙醇沉淀多糖；胞內(nèi)多糖的最佳提取工藝為干菌體加30倍的水，100℃浸提150min，浸提2次。根據(jù)確定的工藝從IsariafarinosaB05菌株液體發(fā)酵獲

3、得的菌絲體及發(fā)酵液中提取得到水溶性胞內(nèi)多糖(IPS)和胞外多糖(EPS)。 IPS和EPS經(jīng)Q-SepharoseFF陰離子交換柱層析和SephacrylS-300HR凝膠柱層析分離得到主峰IPS1和EPS1。經(jīng)SephacrylS-300HR凝膠柱層析證明純化后IPS1和EPS1均一性較好。IPS1分子量為42kDa；糖含量為90.3％，含甘露糖、半乳糖、葡萄糖，摩爾比為8.0：4.8：1.0；糖醛酸含量為8.00％，有氨基糖

4、存在；蛋白含量7.15％，含有11種常見氨基酸。EPS1分子量為208kDa；糖含量為93.4％，含甘露糖、半乳糖和少量葡萄糖，摩爾比為21.6：4.7：1.0；糖醛酸含量為8.06％，有氨基糖存在，蛋白含量4.38％，含有13種常見氨基酸。通過稀堿法確定IPS1和EPS1的糖肽鍵為N-糖苷鍵，紅外光譜顯示，二者為β-吡喃糖。 (3)研究了多糖的生物學(xué)活性。IPS1與EPS1對(duì)S180實(shí)體瘤有明顯的抑制作用，IPS1的劑量為20

5、0mg/kg時(shí)，抑瘤率最大，為61.63％；EPS1的劑量400mg/kg時(shí)最大，為63.10％。IPS1和EPS1可以明顯促進(jìn)荷瘤小鼠抗氧化酶的活性，在抗腫瘤活性最高的劑量組中，SOD和CAT酶活普遍較高。進(jìn)一步研究了蟲草棒束孢多糖的體外抗氧化活性，發(fā)現(xiàn)IPS1具有清除·OH、O2-和H2O2和螯合Fe2+的作用，有強(qiáng)的還原力，可抑制脂質(zhì)過氧化；而EPS1可清除O2-和H2O2，有強(qiáng)的還原力，可抑制脂質(zhì)過氧化，但不能清除.OH和螯合F