PHF1與p53互作的鑒定及其生物學(xué)意義探討.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文 P H F l 通過(guò)穩(wěn)定p 5 3 而抑制腫瘤細(xì)胞增殖及促進(jìn)凋亡的機(jī)制研究目錄 型刪2 8 2 ———————————] 釃舢咖螋一目 錄???????????????????????????????l縮略詞表??????????????????????????????3摘 要???????????????????????????????5A L b s c l ．a(chǎn) c t ???????????????????

2、?????????????????????．．7前言??????????????????????????????????????．．9 日U 舌?????????????????????????????????????????．9材料和方法????????????????????????????．．1 2l 材料????????????????????????????????????．．1 21 宿主菌?????????????????

3、???????????1 22 載體??????????????????????????????．．1 23 細(xì)胞株????????????????????????．1 24 質(zhì)粒??????????????????????????????．．1 25 引物序列????????????????????????1 3I 汀．P C R 引物、構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒的引物和定點(diǎn)突變引物??????1 36 試劑盒和試劑????????????????

4、?????。1 47 抗體??????????????????????????????．．1 58 主要溶液和培養(yǎng)基???????????????????1 69 主要儀器設(shè)備???????????????????????1 92 方法??????????????????????????????????????．2 01 制備D H 5 Q 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞???????????????2 02 構(gòu)建質(zhì)粒???????????????

5、????????2 03 小量質(zhì)粒抽提( T I A N G E N ) ?????????????????2 24 定點(diǎn)突變 ( K O D ．P l u s M u t 唱e n e s i s 飚t ，T O Y O B O ) ??????2 35 細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染?????????????????????????．．2 46 雙熒光素酶報(bào)告反應(yīng)系統(tǒng)檢測(cè)熒光素酶活性?????????2 47 I U ’．P C R ????????

6、?????????????????????．2 48 W e s t e m B l o t t i n g ?????????????????????2 59 G S T 融合蛋白原核表達(dá)及純化???????????????2 610 G S T - p u l l d o w n 實(shí)驗(yàn)???????????????????2 711 熒光定位????????????????????????2 81 2 克隆形成???????????

7、???????????????2 81 3C D K 法檢測(cè)細(xì)胞增殖???????????????????．．2 81 4 體外泛素化?????????????????????．．2 815B r d U 插入法檢測(cè)細(xì)胞增殖( B r d U C e U P r o l i f b r a t i o n E L I S A K i t ，R o c h e ，J a p a n ) ??????????????????????????

8、?????2 91 6P I ( p r o p i d i u m i o d i d e ) 染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡???????????2 93 使用計(jì)算機(jī)分析軟件??????????????????????2 9結(jié) 果????????????????????????????????????????．．3 01 ．P H F l 特異性激活p 5 3 信號(hào)通路??????????????3 02 ．P H F l 對(duì)p 5 3 通路的激

9、活作用依賴(lài)于p 5 3 的存在????????3 23 ．P H F l 增強(qiáng)p 5 3 轉(zhuǎn)錄激活活性???????????????3 34 ．P H F l 與p 5 3 在體內(nèi)互作????????????????????．3 4復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文 P H F l 通過(guò)穩(wěn)定p 5 3 而抑制腫瘤細(xì)胞增殖及促進(jìn)凋亡的機(jī)錆《研究P c G ：A P l ：C I 迮：D R 5 ：G R E ：H S E ：N F A T ：N F l

10、 ( B ：R b ：S R E ：C H X ：G F P ：P B S ：I P ：G S T ：I g G ：q I ；汀一P C R ：P A G E ：T B S ：B S A ：D A P I ：W B ：H A ：s h R N A ：W T ：U b ：a a ：b p ：k D a ：M W ：B2 ．M G ：縮略詞表p o l y c o m b 伊o u pa c t i V a t o r p r o t e

11、i nc √4 小伊r e s p o n s ee l e m e n tD e a t h r e c e p t o r5g l u c o c o r t i c o i dr e s p o n s ee l e m e n th e a t s h o c k r e s p o n s ee l e m e n tN u c l e a r f a c t o r o f a c t i v a t e d T - c e

12、 l l sn u c l e a r f a c t o r _ k a p p aBr e t i n o b l a s t o m as e m m r e s p o n s i V ee l e m e n tc y c l o h e x i m i d e鏟e e n f l u o r e s c e n t p r o t e i np h o s p h a t e b u f 五∞．e ds a l i n eI

13、 m m u n o p r e c i p t a t i o ng l u t a t h i o n eS —t r { m s f e r a s eI m m u n o g l o b u l i nGq u a m i t a t i V e r e V e r s et r a n s c r i p t i o n —P C RP o l y p r o p y l e n e A c y lG e l E l e c

14、 t r o p h o r e s i s1 ’r i s ．b u f r e rS a l i n eB o v i n e S e r u m A l b u m i n4 ，6 一d i a m i d i n o 一2 一p h e n y l i n d o l eW e s t e m B l o th e m a g g l u t i n i ns m a l l h a i 印i n 砌叮Aw i l d —t y