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文檔簡介
1、P53 曾被稱為“cellular gatekeeper”(Levine,1997)和“the guardian of the genome ”(Lane,1992),因為它在協(xié)調(diào)和整合細(xì)胞對多種外界脅迫因子的應(yīng)答過程中發(fā)揮了重要作用。P53像一個負(fù)責(zé)處理和整合信息然后發(fā)號施令的樞紐和控制中心,根據(jù)細(xì)胞面臨的脅迫刺激的種類和刺激強度的差異,啟動不同的下游信號通路,從而決定細(xì)胞的應(yīng)答方式,即細(xì)胞凋亡,細(xì)胞周期阻滯,細(xì)胞衰老,DNA損傷修復(fù)
2、,細(xì)胞代謝狀態(tài)改變或發(fā)生自噬。
不同的脅迫刺激條件可以使p53發(fā)生不同形式的翻譯后修飾變化,進而引起一系列的細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)。P53蛋白包括了N端(氨基端)富含脯氨酸的轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域,DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域,四聚化結(jié)構(gòu)域和C端(羧基端)結(jié)構(gòu)域。P53應(yīng)答多種脅迫條件而進行的翻譯后修飾主要發(fā)生在p53蛋白分子的N端。雖然p53的某些生物學(xué)效應(yīng)與轉(zhuǎn)錄功能無關(guān),但p53對其靶基因的轉(zhuǎn)錄激活是細(xì)胞應(yīng)答各種脅迫刺激的一種非常重要的方式。而p5
3、3蛋白的氨基端不僅與其轉(zhuǎn)錄激活有關(guān),還參與了p53與MDM2的相互作用。除MDM2外,還有很多p53相互作用蛋白都可以影響p53的穩(wěn)定性。
為了尋找新的可能調(diào)節(jié)p53轉(zhuǎn)錄激活的蛋白,利用包含了人源p53蛋白氨基端60個氨基酸的融合蛋白GST-p53N60與HeLa細(xì)胞裂解液進行GST pull-down實驗,通過質(zhì)譜分析獲得了一個新的p53結(jié)合蛋白MCM5。MCM5作為一個DNA 復(fù)制調(diào)控蛋白,它是進化保守的真核細(xì)胞微小染
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