熱休克蛋白70與P53相互作用在酵母雙雜交系統(tǒng)中的檢測及其對P53在細胞內(nèi)定位的影響.pdf

1、肝癌是中國常見的、嚴重危害人類生命的惡性腫瘤之一.HSPs在肝癌發(fā)病機制中的作用和意義仍然不清.我們近年研究發(fā)現(xiàn),在人肝細胞肝癌(HCC)組織中有多種熱休克蛋白表達,其中部分HSP70與P53之間具有細胞核共定位關(guān)系,并用免疫共沉淀的方法證實了二者的相互結(jié)合.為了進一步明確這種相互作用,并尋找二者的相互作用位點,該研究采用GLA4酵母雙雜交系統(tǒng)檢測HSP70與P53之間的相互作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn)報告基因His被激活,而Ade卻沒有被激活.隨后

2、用脂質(zhì)體介導(dǎo)熒光蛋白融合表達載體轉(zhuǎn)染COS7細胞,觀察HSP70與P53之間的相互作用及其對P53在細胞內(nèi)定位的影響.結(jié)果發(fā)現(xiàn),野生型和突變型P53在細胞內(nèi)的定位不同,說明P53的細胞內(nèi)定位與其功能密切相關(guān);在HSP70與P53共轉(zhuǎn)染的細胞中,野生型P53的細胞內(nèi)定位由細胞核改變?yōu)榧毎麧{;HSP70與突變型P53(273mutant)存在細胞漿共定位關(guān)系;但與C末端缺失的突變型P53(342mutant-stop)卻沒有共定位關(guān)系.說明