熱休克蛋白和p53在BK通道介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡與增殖抑制中的作用.pdf

1、課題一 鉀離子通道阻滯劑對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖的影響 目的：多種鉀離子通道涉及惡性腫瘤細(xì)胞增殖的調(diào)控，通過(guò)觀察不同鉀離子通道阻滯劑對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖的影響，初步探討不同亞型鉀通道，特別是大電導(dǎo)鈣激活型鉀通道在宮頸癌細(xì)胞增殖中的作用，為進(jìn)一步研究鉀通道參與惡性腫瘤細(xì)胞增殖調(diào)控的機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 材料和方法：以不同濃度四乙胺、粉防已堿及格列苯脲分別作用于體外培養(yǎng)的人宮頸癌細(xì)胞株HeLa，通過(guò)MTT法、細(xì)胞D

2、NA瓊脂糖凝膠電泳及流式細(xì)胞術(shù)，分別檢測(cè)不同鉀通道阻滯劑對(duì)HeLa細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響，并以免疫印跡法檢測(cè)四乙胺、粉防已堿和格列苯脲對(duì)p53、p21及Bax表達(dá)水平的影響，初步探討鉀通道阻滯劑抑制腫瘤細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)其凋亡的機(jī)制。結(jié)果：四乙胺、粉防已堿可在體外抑制HeLa細(xì)胞增殖，其增殖抑制效應(yīng)具有時(shí)間依賴(lài)和劑量依賴(lài)的特點(diǎn)，并能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、使細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期；格列苯脲則對(duì)HeLa細(xì)胞的增殖無(wú)影響。四乙胺與粉防

3、已堿可上調(diào)p53、p21及Bax蛋白的表達(dá)。 結(jié)論：大電導(dǎo)鈣激活型鉀通道對(duì)人宮頸癌細(xì)胞增殖的調(diào)控具有重要作用，其抗腫瘤效應(yīng)可能與上調(diào)p53、p21及Bax蛋白表達(dá)有關(guān)。大電導(dǎo)鈣激活型鉀通道可能成為潛在的惡性腫瘤治療靶點(diǎn)。 課題二 熱休克蛋白和p53在鉀通道介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡與增殖中的作用 目的：多種鉀離子通道涉及惡性腫瘤細(xì)胞增殖的調(diào)控，通過(guò)探討B(tài)K通道參與惡性腫瘤細(xì)胞增殖與凋亡的調(diào)控機(jī)制，為進(jìn)一步研究鉀通

4、道參與惡性腫瘤細(xì)胞增殖調(diào)控的機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 材料和方法：通過(guò)觀察不同鉀離子通道阻滯劑對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞、人卵巢癌A2780細(xì)胞增殖的影響，以不同濃度四乙胺、粉防已堿及格列苯脲分別作用于體外培養(yǎng)的人宮頸癌細(xì)胞株HeLa及人卵巢癌A2780細(xì)胞，通過(guò)MTT法、細(xì)胞DNA瓊脂糖凝膠電泳、Hoechst33258染色及流式細(xì)胞術(shù)，分別檢測(cè)不同鉀通道阻滯劑對(duì)HeLa細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響，并以免疫印跡法檢測(cè)四乙胺、粉防已堿

5、和格列苯脲對(duì)p53、p21、Bax、HPV18E6、HSP70、HSP90α及HSP90β表達(dá)水平的影響，并通過(guò)全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)驗(yàn)證腫瘤細(xì)胞膜是否存在大電導(dǎo)鈣激活型鉀通道，初步探討鉀通道阻滯劑抑制腫瘤細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)其凋亡的機(jī)制。 結(jié)果：四乙胺、粉防已堿可在體外抑制HeLa細(xì)胞增殖，其增殖抑制效應(yīng)具有時(shí)間依賴(lài)和劑量依賴(lài)的特點(diǎn)，并能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、使細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期；格列苯脲則對(duì)HeLa細(xì)胞的增殖無(wú)影響。四乙胺與粉防已堿