熱休克蛋白抑制劑17-DMAG在體外對(duì)人肝星狀細(xì)胞生長(zhǎng)增殖及細(xì)胞凋亡的作用研究.pdf

1、目的: 研究HSP90抑制劑17-DMAG在體外對(duì)人LX2肝星狀細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖及凋亡機(jī)制。
　　方法: 體外培養(yǎng)人LX2肝星狀細(xì)胞作為受試細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為對(duì)照組和17-DMAG處理組，以24h為作用時(shí)間點(diǎn)，采用細(xì)胞毒試驗(yàn)(MTT法)觀察并計(jì)算不同濃度(100、250、500、1000 nmol/L)和作用時(shí)間(24h、48h、72h)的17-DMAG對(duì)LX2細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率并計(jì)算IC50值;應(yīng)用流式細(xì)胞儀AnnexinⅤ-FITC

2、/PI試劑雙染法檢測(cè)藥物作用48h、72h作用后LX2肝星狀細(xì)胞的凋亡率;Western blot檢測(cè)藥物作用48h、72h作用后α-SMA的表達(dá)，分析灰度值并與對(duì)照組進(jìn)行對(duì)比。
　　結(jié)果: LX2肝星狀細(xì)胞在DMEM培養(yǎng)液中生長(zhǎng)良好，并且當(dāng)細(xì)胞濃度＞5.0×104/ml時(shí)，培養(yǎng)4-5天后，細(xì)胞進(jìn)入平臺(tái)期;17-DMAG能抑制人LX2肝星狀細(xì)胞生長(zhǎng)，且在100-1000 nmol/L濃度范圍內(nèi)及1-5天的時(shí)間范圍內(nèi)呈濃度和時(shí)間依

3、賴性（p＜0.01）并且能夠抑制細(xì)胞增殖，隨藥物濃度(100-1000 nmol/L)加大和作用時(shí)間(24h、48h、72h)延長(zhǎng)，存活細(xì)胞數(shù)量逐漸減少，并計(jì)算在24h、48h、72h的IC50值為:757、380、121nmol/L;流式細(xì)胞儀PI雙染法證實(shí)400 nmol/L的17-DMAG可誘導(dǎo)LX2細(xì)胞凋亡，與24h、48h對(duì)照組(3.07±0.72、7.50±0.95)比較，17-DMAG處理組細(xì)胞凋亡率分別為(46.68±2

4、.46、62.84±2.73)明顯增加(p＜0.01); Westernblot研究結(jié)果表明經(jīng)過(guò)17-DMAG處理作用48h、72h，可使LX2肝星狀細(xì)胞α-SMA表達(dá)減少，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　結(jié)論: 17-DMAG在100-1000nmol/L濃度范圍內(nèi)及1-5天的時(shí)間范圍內(nèi)具有量效和時(shí)效關(guān)系;17-DMAG能夠抑制LX2細(xì)胞增殖，并且流式細(xì)胞儀PI雙染法證實(shí)400 nmol/L的17-DMAG可