血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體抑制劑DMH4對(duì)肺癌細(xì)胞增殖、遷移及凋亡的作用.pdf

1、肺癌是目前死亡率最高的疾病，其中約80％為非小細(xì)胞肺癌。針對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）信號(hào)通路的研究是當(dāng)前的一種分子靶向治療的研究熱點(diǎn)。DMH4(6-[4-[2-(4-Morpholinyl)ethoxy]phenyl]-3-pheny- lpyrazolo[1,5-a]pyrimidine)是一種有效的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial g

2、rowth factor，VEGF）抑制劑,與腺苷酸活化蛋白激酶相比，它是一種更加有效的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體的抑制劑，它對(duì)血管生成具有更強(qiáng)的抑制作用。
　　本研究利用MTT比色法測(cè)定DMH4對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率，結(jié)果得出在DMH4濃度為1 ug/ml下，作用時(shí)間為24小時(shí)時(shí)，肺癌細(xì)胞H460、A549、成纖維母細(xì)胞MRC5和脂肪干細(xì)胞ADSC的生存率分別為75.10%、51.47%、106.74%和109.73%，表明DMH4對(duì)肺癌

3、細(xì)胞H460和A549的抑制性很強(qiáng)，而成纖維母細(xì)胞MRC5和脂肪干細(xì)胞ADSC對(duì)DMH4不敏感；在作用時(shí)間為24小時(shí)時(shí)，DMH4濃度分別為0.25ug/ml、0.5ug/ml、1ug/ml、2ug/ml、4ug/ml、8ug/ml、16ug/ml時(shí)，肺癌細(xì)胞A549的生存率分別為77.25%、55.94%、51.47%、43.23%、42.82%、42.61%和40.04%，證明DMH4的抑制率隨濃度的升高而增強(qiáng)。通過MTT比色法檢測(cè)D

4、MH4對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率可知，DMH4的作用具有一定的細(xì)胞選擇性，且具有一定的劑量依賴性。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)（Scratch Test）結(jié)果證明，DMH4對(duì)肺癌細(xì)胞H460和A549的遷移有一定的抑制作用。之后的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)（Flow Cytometry，F(xiàn)MC）了DMH4處理后用Annexin V/PI染色的肺癌細(xì)胞H460和A549的凋亡情況，發(fā)現(xiàn)了DMH4可以促進(jìn)細(xì)胞早期凋亡的發(fā)生。用Western Blot蛋白免疫印跡法檢測(cè)了1ug

5、/ml的 DMH4處理后肺癌細(xì)胞中磷酸化的 VEGFR2有明顯的下調(diào)，顯示了DMH4抑制了VEGFR2及其對(duì)VEGFR信號(hào)通路的抑制作用。abcam公司的人體細(xì)胞凋亡抗體芯片（Human Apoptosis Antibody Array-Membrane）檢測(cè)了43種細(xì)胞凋亡相關(guān)的蛋白，其中DMH4處理過的肺癌細(xì)胞A549中，各細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)均明顯升高，表明DMH4可能是通過影響VEGF信號(hào)通路促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。終上所述，DMH4