致病疫霉PI-PIPKD5相互作用蛋白的鑒定.pdf

1、疫霉菌是一類毀滅性的植物病原菌，共有超過一百個菌種，其中最聲名狼藉的要數(shù)致病疫霉?，F(xiàn)研究表明，疫霉菌具有無性生殖和有性生殖兩種生殖方式，兩種生殖方式均是靠激素來調(diào)節(jié)。在真核生物體中，G蛋白偶聯(lián)受體(G protein coupledreceptors，GPCR)是信號傳導的重要受體，在大豆疫霉中有一類特殊的GPCR，其N端是七次跨膜結構，C端連接了磷脂酰肌醇-4-磷酸鹽-5-激酶結構域(PIPK)，此類GPCR稱之為GPCR-PIPK(

2、GK)。在大豆疫霉中，功能分析其中兩個GK編碼基因PsPIPK4和PsPIPK10，發(fā)現(xiàn)它們分別參與調(diào)控大豆疫霉的無性生殖和有性生殖。
　　在數(shù)據(jù)庫中比對發(fā)現(xiàn)，致病疫霉Pi-PIPKD5與大豆疫霉PsPIPK10同源性極高，那么Pi-PIPKD5很可能參與了致病疫霉的有性生殖調(diào)控。因此，本研究通過酵母雙雜交技術鑒定了Pi-PIPKD5的相互作用蛋白，對深入揭示Pi-PIPKD5的功能具有重要意義。本試驗首先利用基因重組技術構建含有

3、Pi-PIPKD5N端與C端編碼區(qū)的誘餌質(zhì)粒，然后對誘餌質(zhì)粒進行毒性檢測與自激活檢測。結果發(fā)現(xiàn)C端誘餌蛋白對酵母菌株存在毒性，而N端誘餌蛋白無毒性且在酵母菌種沒有發(fā)生自激活。其次，本試驗成功構建致病疫霉cDNA文庫，并使用Pi-PIPKD5 N端誘餌質(zhì)粒篩選致病疫霉cDNA文庫，得到與Pi-PIPKD5 N端相互作用的蛋白有31個，再利用體內(nèi)回交驗證得到真正的陽性相互作用蛋白有4個。將陽性獵物質(zhì)粒進行測序，通過與致病疫霉蛋白數(shù)據(jù)庫比對，