Annexin A1相互作用蛋白的篩選、鑒定 及蛋白分子網(wǎng)絡(luò)圖譜的繪制.pdf

1、[目的]篩選與鑒定鼻咽癌細(xì)胞中Annexin A1的相互作用蛋白，繪制其在鼻咽癌侵襲轉(zhuǎn)移中的調(diào)控蛋白質(zhì)分子網(wǎng)絡(luò)圖譜，初步了解Annexin A1在鼻咽癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用與機(jī)制。
　　[方法]收集Annexin A1高表達(dá)的低轉(zhuǎn)移鼻咽癌6-10B細(xì)胞總蛋白，采用免疫共沉淀結(jié)合凝膠電泳分離 Annexin A1相互作用蛋白,二維液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜鑒定相互作用蛋白，并進(jìn)行基因本體論、功能聚類(lèi)、信號(hào)通路、蛋白-蛋白相互作用等生物信息學(xué)分析，

2、繪制Annexin A1在鼻咽癌侵襲轉(zhuǎn)移中的調(diào)控蛋白質(zhì)分子網(wǎng)絡(luò)圖譜。運(yùn)用免疫共沉淀結(jié)合蛋白質(zhì)印跡法對(duì)Annexin A1關(guān)鍵相互作用組蛋白S100A9、Vimentin進(jìn)行驗(yàn)證。
　　[結(jié)果]1、采用免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜分析，在鼻咽癌6-10B細(xì)胞中共鑒定了436個(gè)Annexin A1相互作用蛋白。2、通過(guò)GOTERM_BP分析顯示：Annexin A1相互作用蛋白的生物學(xué)過(guò)程主要涉及到刺激反應(yīng)、蛋白定位、細(xì)胞代謝過(guò)程等；GOTER

3、M_MF分析顯示：Annexin A1相互作用蛋白的分子功能主要涉及到催化作用、陽(yáng)離子結(jié)合功能、蛋白結(jié)合功能、核苷酸結(jié)合、細(xì)胞骨架及 ATP結(jié)合功能等；GOTERM_CC分析顯示：Annexin A1相互作用蛋白的定位涉及到細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞器、細(xì)胞膜及細(xì)胞骨架等多個(gè)部位。3、通過(guò)功能聚類(lèi)分析顯示：Annexin A1相互作用蛋白可聚類(lèi)成21個(gè)功能相關(guān)簇，其功能主要涉及到鈣依賴性磷脂結(jié)合、信號(hào)肽、膜的組分、跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)、蛋白激酶活性、胞質(zhì)囊泡的組

4、分、細(xì)胞骨架組織。4、通過(guò)KEGG和Biocarta信號(hào)通路分析顯示：Annexin A1相互作用蛋白涉及35條KEGG信號(hào)通路和7條Biocarta信號(hào)通路，其中有4個(gè)蛋白涉及到細(xì)胞骨架信號(hào)通路，9個(gè)蛋白涉及到粘附連接信號(hào)通路，12個(gè)蛋白涉及到跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)信號(hào)通路。5、通過(guò)蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)分析顯示：S100A9、Vimentin蛋白與Annexin A1形成相互作用組。6、應(yīng)用免疫共沉淀結(jié)合蛋白質(zhì)印跡法證實(shí)S100A9、Viment