EZH2相互作用蛋白篩選及鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：篩選并鑒定鼻咽癌細(xì)胞中EZH2(enhancer ofzeste homolog2， EZH2)的相互作用蛋白，探討EZH2在鼻咽癌形成與進(jìn)展中的作用機(jī)制。
　　方法：1.通過構(gòu)建 Flag-EZH2病毒表達(dá)質(zhì)粒，利用慢病毒系統(tǒng)獲得過表達(dá)Flag-EZH2的5-8F細(xì)胞系，并提取其細(xì)胞核蛋白。2.采用免疫共沉淀結(jié)合凝膠電泳分離 EZH2相互作用蛋白，利用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)鑒定相互作用蛋白。3.選取RBMX和

2、TF1蛋白，通過免疫共沉淀和Western Blot的方法再次驗(yàn)證與EZH2的相互作用。
　　結(jié)果：1.構(gòu)建Flag-EZH2病毒表達(dá)質(zhì)粒，獲得過表達(dá)EZH2的5-8F細(xì)胞系，提取了此細(xì)胞系的胞核蛋白。2.篩選出17中可能與 EZH2相互作用的蛋白。3.驗(yàn)證RBMX蛋白與EZH2蛋白之間不存在相互作用，而TF1蛋白（本實(shí)驗(yàn)室自編代號(hào)蛋白）與EZH2蛋白之間存在相互作用。、
　　結(jié)論：1.本研究采用免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜分析在鼻咽

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