基于血小板活化研究去脂軟肝方防治大鼠早期脂肪肝的作用機制.pdf

1、目的：
　　 探討實驗性大鼠早期非酒精性脂肪肝與血小板活化的關(guān)系；探討去脂軟肝方抗血小板活化的作用及其對非酒精性脂肪肝疾病發(fā)生發(fā)展的影響，以探明去脂軟肝方在非酒精性脂肪肝發(fā)病中的防治作用機制。
　　 方法：
　　 1.模型制備：SD雄性大鼠78只，隨機分成3組，正常組24只大鼠以普通飼料喂養(yǎng)，模型組27只和用藥組27只大鼠以高脂飼料(普通飼料基礎(chǔ)上加10％豬油，2％膽固醇。送與加工廠生產(chǎn)加工)喂養(yǎng)。實驗動物自由飲

2、水，分籠飼養(yǎng)于云南中醫(yī)學院動物房，各實驗組分別于實驗4周末、8周末、12周末分批次剖殺取材，進行動態(tài)指標觀察。
　　 2.分組給藥：自造模之日起，正常組和模型組大鼠予生理鹽水灌胃1ml·200g-1，每日1次，去脂軟肝方用藥組按臨床等效量換算，予去脂軟肝方湯藥灌胃1ml·200g-1，每日1次。
　　 3.指標檢測：造模4周末、8周末、12周末，分別取大鼠血樣及肝組織標本，測定大鼠體重、肝臟濕重、計算肝體重比指數(shù)。蘇木精

3、-伊紅(HE)染色觀察肝臟脂肪變性情況。測定大鼠血清肝功能[丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)]、血脂[總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)]、肝脂、血小板聚集率及血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素Fla(6-Keto-PGFla)、P-選擇素(CD62p)。
　　 結(jié)果：
　　 1.一般情況：與正常組比較，模型組大鼠體重增長較明顯，4周末模型組部分大鼠復出現(xiàn)食欲下降，行動活躍性下降，大便粘軟

4、偶有稀溏，色淡黃等現(xiàn)象。部分大鼠復出現(xiàn)食欲下降，行動活躍性下降，大便粘軟偶有稀溏，色淡黃等現(xiàn)象。8周末模型組大鼠體重高于正常組和用藥組(P<0.05)，12周末模型組大鼠體重繼續(xù)高于正常組和用藥組，且高于4周末模型組和8周未模型組大鼠的體重(P<0.05)。8周末模型組大鼠肝濕重高于正常組和用藥組(P<0.05)，且高于4周末模型組大鼠肝濕重(P<0.05)，12周末模型組大鼠的肝濕重升高更為明顯。
　　 2.形態(tài)學改變：與正常

5、組比較，8周末模型組大鼠肝臟病理學HE染色光鏡下可見超過1/3的肝細胞胞漿中出現(xiàn)大小不一的圓形脂滴空泡。12周末模型組切片可見超過2/3的肝細胞胞漿中出現(xiàn)大小不一的圓形脂滴空泡，部分標本可見肝細胞腫大，胞漿疏松呈網(wǎng)狀、胞漿疏松化，嚴重者胞漿幾乎完全氣球樣變。
　　 3.生化指標：與正常組含量相比，4周末，模型組大鼠血清TG升高，(P<0.05)；12周末，模型組與正常組和用藥組相比，血清TG升高，且高于8周末模型組(P<0.05

6、)。8周末模型組大鼠血清TC含量高于正常組和用藥組(P<0.05)，12周末模型組含量高于正常組和用藥組(P<0.05)。
　　 大鼠肝脂含量，12周末模型組大鼠肝臟TG含量較正常組和用藥組高(P<0.05)；8周末模型組大鼠肝臟TC含量較正常組和用藥組高(P<0.05)，12周末模型組較正常組和用藥組高(P<0.05)。
　　 大鼠血清轉(zhuǎn)氨酶，4周末模型組大鼠血清AST高于正常組和用藥組(P<0.05)。8周末模型組大

7、鼠血清ALT高于正常組和用藥組(P<0.05)，且高于4周末大鼠血清ALT含量(P<0.05)；12周末模型組大鼠血清ALT高于正常組和用藥組(P<0.05)，且高于4周末和8周末大鼠血清ALT含量(P<0.05)。
　　 大鼠血小板聚集率4周末模型組高于正常組和用藥組(P<0.05)；8周末模型組高于正常組和用藥組(P<0.05)，且高于4周末模型組大鼠血小板聚集率(P<0.05)；12周末模型組高于正常組和用藥組(P<0.0

8、5)，且高于4周末和8周末模型組大鼠血小板聚集率(P<0.05)。
　　 大鼠血清血栓素B2含量4周末模型組較正常組和用藥組高(P<0.05)；8周末大鼠血清血栓素B2模型組較正常組和用藥組模型組高(P<0.05)，且高于4周末模型組大鼠血清血栓素B2含量；12周末大鼠血清血栓素B2模型組較正常組高(P<0.05)，且高于4周末模型組和8周末現(xiàn)在組大鼠血清血栓素B2含量。
　　 大鼠血清6-Keto-PGFla含量4周末

9、模型組較正常組和用藥組低(P<0.05)；8型組(P<0.05)。12周末用藥組高于8周末和4周末用藥組(P<0.05)。
　　 大鼠血清CD62p含量8周末模型組較正常組和用藥組高(P<0.05)；12周末模型組較正常組和用藥組高(P<0.05)，且高于8周末和4周末模型組(P<0.05)。12周末用藥組低于8周末用藥組含量(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.實驗性高脂飼料誘導的大鼠早期脂肪肝模型病理形

10、態(tài)改變在8周末形成，表現(xiàn)為8周末，模型組大鼠肝臟HE染色，可見超過1/3的肝細胞胞漿中出現(xiàn)大小不一的圓形脂滴空泡，有的空泡融合將細胞核擠向胞膜下。12周末肝臟脂肪變更明顯。
　　 2.實驗性高脂飼料誘導的大鼠早期脂肪肝模型生化指標在4周末成升高趨勢。表現(xiàn)為4周末，模型組大鼠血清轉(zhuǎn)氨酶升高，肝功能損傷，血脂升高，肝脂升高。8周末、12周末更為明顯。綜合結(jié)論1表明本實驗造模成功。
　　 3.實驗性高脂飼料誘導的大鼠早期脂肪肝

11、模型存在血小板活化。表現(xiàn)為4周末，模型組大鼠血小板聚集率升高、血栓素B2升高、6-Keto-PGFla降低、以及CD62p升高。8周末、12周末更為明顯。表明高脂飼料誘導的大鼠早期脂肪肝的發(fā)生發(fā)展和血小板活化存在一定的聯(lián)系。
　　 4.實驗使用的中藥湯劑去脂軟肝方可顯著改善高脂飼料誘導的模型大鼠早期脂肪肝的發(fā)生發(fā)展，對于降低血清和肝臟總膽固醇、甘油三酯效果明顯，可逆轉(zhuǎn)肝功能損傷以及抑制血小板活化，從而防治實驗性高脂飼料誘導的大鼠