別構(gòu)調(diào)節(jié)sigma-機1受體的抗抑郁作用及其制研究.pdf

1、本文對別構(gòu)調(diào)節(jié)sigma-機1受體的抗抑郁作用及其制進行了研究。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：SOMCL-668具有別構(gòu)調(diào)節(jié)sigma-1受體的活性。
　　目的：Sigma-1受體在抑郁癥等眾多神經(jīng)精神疾病治療中有重要作用，同時，別構(gòu)調(diào)節(jié)是調(diào)節(jié)受體功能重要途徑之一。因此，別構(gòu)調(diào)節(jié)sigma-1可能成為抑郁癥治療的新靶點。前期競爭結(jié)合實驗表明，新型化合物3-methyl-phenyl-2,3,4,5-tetrahydro

2、-1H-benzo[d]azepin-7-ol(SOMCL-668)能以別構(gòu)調(diào)節(jié)的方式促進sigma-1受體特異性激動劑3H-(+)-pentazocine與sigma-1受體的結(jié)合。在此研究基礎上，本部分將從生物學功能角度進一步證實SOMCL-668的別構(gòu)調(diào)節(jié)功能，從而為研究別構(gòu)調(diào)節(jié)sigma-1受體的作用提供有力支持。
　　方法：培養(yǎng) HT22小鼠海馬神經(jīng)元細胞系，采用細胞免疫熒光法，檢測SOMCL-668單獨或聯(lián)用sigma

3、-1受體激動劑(+)SKF-10047對sigma-1受體與Bip(binding immunoglobulin protein)蛋白共定位的影響；采用免疫共沉淀方法，檢測SOMCL-668單獨或聯(lián)用sigma-1受體激動劑(+)SKF-10047對sigma-1受體與Bip結(jié)合情況的影響；分離細胞膜成分，檢測SOMCL-668單獨或聯(lián)用sigma-1受體激動劑(+)SKF-10047對sigma-1受體轉(zhuǎn)位現(xiàn)象的影響；培養(yǎng)原代神經(jīng)元，

4、檢測SOMCL-668單獨或聯(lián)用sigma-1受體激動劑(+)SKF-10047對神經(jīng)元神經(jīng)突起生長以及BDNF(brain-derived neurotrophic factor,腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子)分泌的影響。
　　結(jié)果：SOMCL-668本身不能改變sigma-1受體和Bip的共定位或結(jié)合，但是可以明顯促進激動劑誘導的sigma-1受體與Bip的分離；同時，SOMCL-668單獨不能，但聯(lián)用激動劑后顯著增加sigma-1受體

5、向細胞膜的轉(zhuǎn)位；此外，SOMCL-668自身不具備，但是可以顯著增加激動劑誘導的神經(jīng)突起生長和BDNF分泌的能力。
　　結(jié)論：SOMCL-668具備別構(gòu)調(diào)節(jié)sigma-1受體的活性，是一種新型的sigma-1受體別構(gòu)調(diào)節(jié)劑。
　　第二部分：別構(gòu)調(diào)節(jié)sigma-1受體具有抗抑郁作用。
　　目的：本部分將以SOMCL-668為工具，重點考察別構(gòu)調(diào)節(jié)sigma-1受體是否產(chǎn)生抗抑郁作用，并探討其可能的抗抑郁作用機制。

6、　　方法：⑴采用小鼠強迫游泳、懸尾實驗等急性抗抑郁藥物篩選模型初步探討SOMCL-668的抗抑郁作用；⑵采用慢性不可預知性溫和刺激制作抑郁癥模型，糖水偏好、曠場實驗等檢測 SOMCL-668的抗抑郁作用；免疫印跡法檢測 SOMCL-668對抑郁癥中BDNF-GSK3β(glycogen synthase kinase3β,糖原合成激酶3β)通路的影響變化；⑶采用免疫印跡法，同時應用藥理學及分子生物學手段檢測sigma-1受體對GSK3β

7、活性的抑制作用及其調(diào)控機制；⑷采用免疫印跡法，從動物及細胞水平觀察SOMCL-668對GSK3β活性的抑制作用；采用藥理學手段間接激活GSK3β，考察GSK3β在SOMCL-668的抗抑郁效應中的作用。
　　結(jié)果：①SOMCL-668可以減少強迫游泳、懸尾實驗中小鼠不動時間，表現(xiàn)出抗抑郁作用，提前給以sigma-1受體拮抗劑BD1047則取消其抗抑郁作用；②SOMCL-668可以改善抑郁癥模型中小鼠快感缺乏、焦慮及體重下降等癥狀，

8、同時可以緩解抑郁癥導致的BDNF及GSK3β(ser-9)磷酸化水平的下調(diào)，并且SOMCL-668抗抑郁起效時間(1周內(nèi))優(yōu)于現(xiàn)有抗抑郁藥物文拉法辛。③給予sigma-1受體激動劑或過表達sigma-1受體均能增加GSK3β(ser-9)磷酸化水平(即抑制其活性)，且Trk B受體抑制劑、AKT通路抑制劑可以拮抗sigma-1受體對GSK3β(ser-9)磷酸化的影響。結(jié)果證實sigma-1受體可以調(diào)控GSK3β活性。④在動物實驗中，S

9、OMCL-668可以快速增加小鼠海馬中GSK3β(ser-9)磷酸化水平，sigma-1受體拮抗劑BD1047則阻斷這種作用；在細胞實驗中，SOMCL-668可以通過別構(gòu)調(diào)節(jié)的方式增加HT22細胞中GSK3β(ser-9)磷酸化水平，siRNA沉默 sigma-1受體表達后同樣取消這種作用。藥理學激活 GSK3β可以阻斷SOMCL-668在強迫游泳及懸尾實驗中的抗抑郁作用。
　　結(jié)論：sigma-1受體別構(gòu)調(diào)節(jié)劑SOMCL-668