別構調節(jié)sigma-1受體在小膠質細胞介導炎癥中的作用及其機制研究.pdf

1、目的：
　　研究sigma-1受體別構調節(jié)劑SKF83959對脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)介導的小膠質細胞炎癥反應的抗炎作用以及炎癥介質釋放所引起的神經(jīng)毒性的保護作用，并進一步探討SKF83959抗炎作用的分子機制。
　　方法：
　　利用LPS刺激的BV2小膠質細胞，MTT法檢測細胞活性；收集BV2細胞培養(yǎng)液上清，分別用 Griess法和 ELISA法檢測一氧化氮（NO）和腫瘤壞死因子（TNF

2、-α）的含量；收集BV2細胞超聲破碎后進行蛋白定量，用ELISA法檢測細胞內DHEA的含量；Quantitative real-time PCR(Q-PCR)方法檢測炎癥介質TNF-α、IL-1β和iNOS的mRNA表達水平；Western Blot方法檢測iNOS蛋白的表達以及MAPKs和IKK/IκBα蛋白磷酸化水平；收集細胞，流式細胞術檢測細胞內活性氧（ROS）的水平；用放射性配基結合實驗測定SKF83959對脫氫表雄酮（dehy

3、droepiandrosterone，DHEA）與sigma-1受體結合能力的影響；BV2小膠質細胞條件培養(yǎng)基與HT-22海馬神經(jīng)元細胞共培養(yǎng)，收集細胞，采用流式細胞術檢測神經(jīng)元細胞凋亡水平，研究SKF83959對LPS介導的BV2小膠質細胞炎癥介質引起的神經(jīng)毒性的保護作用。
　　結果：
　　SKF83959顯著抑制LPS激活的BV2小膠質細胞炎癥反應，但被sigma-1受體拮抗劑BD1047和BD1063以及DHEA合成抑

4、制劑酮康唑阻斷；SKF83959促進了DHEA與sigma-1受體結合，并以正向協(xié)同的方式增強了外源性DHEA的抗炎作用；Sigma-1受體拮抗劑BD1047和BD1063也阻斷了SKF83959和DHEA的協(xié)同抗炎作用；在小膠質細胞條件培養(yǎng)實驗中，SKF83959可以改善小膠質細胞炎癥介質對HT-22神經(jīng)元細胞的神經(jīng)毒性；SKF83959的抗炎作用與MAPK/ERK和NFκB信號通路激活以及D1受體活化并不相關。
　　結論：