2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩89頁未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、研究背景:
  缺血性腦卒中是一種致殘及致死性均高的疾病。腦缺血所致的損傷不僅來自急性期缺血導(dǎo)致的腦損傷,也來自于后期繼發(fā)的炎癥反應(yīng)造成的腦損傷。目前急性腦缺血的治療藥物僅有溶栓藥,對(duì)于腦缺血后期的治療手段十分缺乏。
  小膠質(zhì)細(xì)胞是腦內(nèi)介導(dǎo)炎癥和免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞,其持續(xù)激活介導(dǎo)腦缺血慢性期的炎癥。激活的小膠質(zhì)細(xì)胞有兩種類型,分別稱為經(jīng)典激活(classicalactivation)的小膠質(zhì)細(xì)胞和選擇性激活(alterna

2、tive activation)的小膠質(zhì)細(xì)胞,一般認(rèn)為,M1型極化的小膠質(zhì)細(xì)胞可釋放多種炎癥因子會(huì)對(duì)大腦神經(jīng)功能恢復(fù)將產(chǎn)生有害作用;而M2型極化的小膠質(zhì)細(xì)胞被認(rèn)為具有抗炎作用。因而調(diào)整小膠質(zhì)細(xì)胞的激活狀態(tài)(極化類型)可能作為抗腦缺血損傷治療的靶點(diǎn)事件。
  煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(NicotinamidePhosporibosyltransferase,NAMPT),又被稱作內(nèi)臟脂肪素(visfatin)和前B細(xì)胞克隆增強(qiáng)因子(Pr

3、e-B-cell colony-enhancingfactor, PBEF),是煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)補(bǔ)救合成途徑的限速酶,NAMPT通過NAD及NAD依賴的酶(如Sirtuins、PARPs)在細(xì)胞物質(zhì)能量代謝、衰老、炎癥、免疫等過程中起重要作用。NAMPT在體內(nèi)廣泛存在,并可被外周炎癥細(xì)胞如淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞等釋放,而進(jìn)一步參與外周炎癥過程;NAM

4、PT特異性抑制劑FK866被報(bào)道有明顯的抗炎作用。在中樞,NAMPT主要表達(dá)于神經(jīng)元,膠質(zhì)細(xì)胞不表達(dá)NAMPT。因而,有關(guān)NAMPT在中樞炎癥中的作用,如其在腦缺血后的炎癥中的作用報(bào)道很少。
  我們實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn),在老年小鼠腦內(nèi),NAMPT大量表達(dá)于小膠質(zhì)細(xì)胞,而長(zhǎng)期慢性的中樞炎癥是老年腦的主要特征之一;另外,我們還發(fā)現(xiàn),NAMPT在大鼠腦缺血急性期不表達(dá)在小膠質(zhì)細(xì)胞,但在大鼠腦缺血后期,小膠質(zhì)細(xì)胞大量表達(dá)NAMPT,而星形膠質(zhì)細(xì)胞

5、始終不表達(dá)NAMPT;腦缺血后腦脊液中NAMPT水平升高;我們推測(cè),腦缺血后期小膠質(zhì)細(xì)胞大量表達(dá)NAMPT與小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的慢性炎癥有關(guān),而腦缺血后腦脊液中高水平的NAMPT除來自損傷的神經(jīng)元和外周的NAMPT經(jīng)損傷的血腦屏障滲入外,還可能來自小膠質(zhì)細(xì)胞的釋放,這些釋放的NAMPT也參與了小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的缺血慢性期炎癥。因而,本課題關(guān)注以下問題:1)小膠質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)表達(dá)的NAMPT是否參與調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的腦缺血慢性期的炎癥,其涉及的機(jī)

6、制有哪些?2)在缺血和炎癥條件下,小膠質(zhì)細(xì)胞能否釋放NAMPT?小膠質(zhì)細(xì)胞釋放NAMPT的具體出胞機(jī)制是怎樣的?
  研究目的:
  探討在整體腦缺血過程中及離體缺血條件下,小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的NAMPT對(duì)腦缺血慢性期炎癥的調(diào)控及其作用機(jī)制;在缺血和炎癥條件下,小膠質(zhì)細(xì)胞釋放NAMPT的出胞途徑及其影響因素。
  研究方法:
  第一部分:
  以NAMPT抑制劑FK866側(cè)腦室注射預(yù)給藥,大鼠局灶性腦缺血再灌

7、注處理(MCAO1h/R14d)后,以行為學(xué)檢測(cè)反映大鼠神經(jīng)功能損傷/恢復(fù)情況,腦片免疫組化、免疫熒光染色觀察神經(jīng)元存活、星形膠質(zhì)細(xì)胞及小膠質(zhì)細(xì)胞激活情況;以缺糖缺氧再恢復(fù)(OGD1 h/R24 h)處理原代培養(yǎng)小膠質(zhì)細(xì)胞,用免疫熒光染色觀察原代大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞NAMPT的表達(dá)情況;以FK866預(yù)處理給藥,原代大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞OGD1 h/R24 h處理后,觀察細(xì)胞形態(tài)變化;以不同濃度FK866預(yù)處理給藥后,以O(shè)GD1 h/R24 h處理小

8、鼠小膠質(zhì)細(xì)胞株BV2細(xì)胞,觀察BV2小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)變化,檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)炎癥因子的釋放;以O(shè)GD1 h/再恢復(fù)0-24 h處理 BV2細(xì)胞后,檢測(cè)BV2細(xì)胞內(nèi)M1與M2型標(biāo)記物的表達(dá);以FK866預(yù)處理給藥后,以O(shè)GD1 h/R24 h處理BV2細(xì)胞,檢測(cè)BV2細(xì)胞內(nèi)M1與M2型標(biāo)記物的表達(dá);以O(shè)GD1 h/R24 h處理BV2細(xì)胞,檢測(cè)胞漿和細(xì)胞核的NF-κB表達(dá)水平;以FK866預(yù)處理,檢測(cè)OGD1 h/R24 h處理后胞漿和細(xì)胞核

9、NF-κB表達(dá)水平變化;以NF-κB抑制劑做預(yù)處理,在OGD1 h/R24h處理BV2細(xì)胞后,檢測(cè)炎癥因子TNF-α、IL-6和NAMPT的表達(dá)。
  第二部分:
  原代大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞以O(shè)GD1h/R24h處理后,免疫熒光染色觀察NAMPT細(xì)胞內(nèi)分布和表達(dá),ELISA檢測(cè)細(xì)胞釋放NAMPT,同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞處理后培養(yǎng)基上清LDH活性變化,以及PI染色鑒定細(xì)胞壞死;采用體外模擬缺血條件(OGD/R)以及以炎癥條件(TNF-α)單

10、獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用小膠質(zhì)細(xì)胞釋放刺激因子ATP處理BV2細(xì)胞后,以免疫熒光染色聯(lián)合特定標(biāo)記分子確定法,檢測(cè)NAMPT與溶酶體、多種內(nèi)體是否存在共定位;以透射電鏡觀察BV2細(xì)胞的囊泡釋放,并通過囊泡直徑測(cè)量初步確定BV2細(xì)胞經(jīng)以上處理后釋放大量外泌體;以免疫電鏡觀察BV2初步確定NAMPT通過外泌體途徑釋放;采用超速離心法或商業(yè)性外泌體提取試劑盒方法收集細(xì)胞上清中的外泌體后,以Western blotting方法檢測(cè)外泌體中NAMPT的量;以磷

11、脂酶D抑制劑預(yù)處理后,以O(shè)GD/R聯(lián)合ATP處理BV2細(xì)胞,并提取細(xì)胞上清中的外泌體,以Western blotting檢測(cè)外泌體中NAMPT量的釋放量變化。
  研究結(jié)果:
  第一部分小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的NAMPT對(duì)腦缺血慢性期炎癥的調(diào)控作用及其作用機(jī)制
  在整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,NAMPT抑制劑FK866(10 nM)側(cè)腦室預(yù)給藥可改善局灶性腦缺血再灌注(MCAO1 h/R14d)所致的大鼠神經(jīng)功能下降,減小腦梗死體積,

12、提高神經(jīng)元存活率,抑制膠質(zhì)疤痕形成,抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活和增殖;在原代培養(yǎng)的小膠質(zhì)細(xì)胞上,離體缺血條件——缺糖缺氧再恢復(fù)(OGD1 h/R24 h)可誘導(dǎo)原代小膠質(zhì)細(xì)胞激活并伴隨NAMPT上調(diào)表達(dá);FK866(1 nM)預(yù)處理可抑制OGD1h/R24 h誘導(dǎo)的原代小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)變圓和激活;在小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞株BV2細(xì)胞上,F(xiàn)K866(0.001-1 nM)抑制OGD1 h/R24h誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞形態(tài)變圓及TNF-α、NAMPT、IL-6的

13、釋放;FK866可逆轉(zhuǎn)OGD1 h/R0-24 h誘導(dǎo)BV2細(xì)胞的M1型極化的標(biāo)記分子TNF-α、IL-6的mRNA的表達(dá)上調(diào)和M2型極化的標(biāo)記分子CD206、Arg-1的mRNA的表達(dá)下調(diào)水平;FK866(1 nM)可顯著抑制OGD1h/R24 h誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞NF-κB核移位;NF-κB的抑制劑PDTC(50μM)可部分逆轉(zhuǎn)OGD1 h/R24 h誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞M1型極化。
  第二部分缺血和炎癥條件下小膠質(zhì)細(xì)胞釋放NAMP

14、T的出胞途徑及其影響因素
  OGD/R處理可誘導(dǎo)原代小膠質(zhì)細(xì)胞主動(dòng)釋放NAMPT;免疫熒光染色結(jié)果表明,NAMPT與溶酶體、自噬體、內(nèi)體無共定位;以O(shè)GD/R或TNFα處理BV2細(xì)胞后,NAMPT在細(xì)胞內(nèi)發(fā)生移位(向胞膜下分布),而OGD/R或TNFα合并應(yīng)用ATP能使細(xì)胞表面“長(zhǎng)出”有大量NAMPT陽性的小囊泡;對(duì)以透射電鏡獲取這些囊泡的照片,進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)大部分小泡直徑在100 nm左右,與外泌體的大小相符;免疫電鏡結(jié)果可確

15、證BV2細(xì)胞釋放的,這些外泌體很多是NAMPT陽性的;以超速離心收集這些外泌體,并進(jìn)一步做免疫印跡檢測(cè),發(fā)現(xiàn)NAMPT在外泌體中大量表達(dá);這充分說明,BV2細(xì)胞通過外泌體釋放NAMPT;我們還發(fā)現(xiàn)磷脂酶D抑制劑1-butanol能夠抑制NAMPT通過外泌體釋放,說明磷脂酶D參與調(diào)控NAMPT的釋放。
  結(jié)論:
  1.腦缺血后期小膠質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)表達(dá)并釋放NAMPT;抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的NAMPT可通過逆轉(zhuǎn)腦缺血誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞M

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論