α-細(xì)辛醚調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的抗癲癇作用研究.pdf

1、第一部分α-細(xì)辛醚對模型大鼠癲癇后認(rèn)知功能及腦內(nèi)免疫炎癥反應(yīng)的影響
　　目的:研究α-細(xì)辛醚對Li-pilocarpine模型大鼠癲癇自發(fā)反復(fù)發(fā)作以及學(xué)習(xí)記憶功能的影響，并探討α-細(xì)辛醚對癲癇后大鼠腦組織內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫炎癥反應(yīng)的作用，以明確α-細(xì)辛醚的抗癲癇作用及其調(diào)控免疫炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)及其作用靶點(diǎn)。
　　方法：建立大鼠Li-Pilocarpine癲癇模型，隨機(jī)分為正常對照組，模型組以及α-細(xì)辛醚干預(yù)組(200

2、mg.kg-1)，錄像記錄分析大鼠癲癇自發(fā)反復(fù)發(fā)作的潛伏期、頻率，水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察各組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，免疫組化法觀察α-細(xì)辛醚對各組大鼠腦組織內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響，EMSA法檢測腦組織內(nèi)NF-κB活化、入核，Western-blotting法檢測NF-κB活化關(guān)鍵蛋白IκB-α、IKK-β及其磷酸化形式的表達(dá)，ElISA法檢測各組大鼠腦組織內(nèi)炎癥因子IL-1β、TNF-α含量。
　　結(jié)果：與實(shí)驗(yàn)組相比，α-細(xì)辛醚干預(yù)可使大鼠自發(fā)

3、反復(fù)發(fā)作潛伏期延長，癲癇發(fā)作頻率降低（P＜0.05），并可改善Li-pilocapine模型大鼠癲癇后學(xué)習(xí)記憶及認(rèn)知功能（P＜0.05）；癲癇后大鼠腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞活化增殖以及腦內(nèi)炎癥因子 TNF-α、IL-1β較對照組表達(dá)明顯增多（P＜0.05），且在癲癇后3天達(dá)到高峰；與模型組相比，α-細(xì)辛醚可抑制Li-pilocapine模型大鼠癲癇后小膠質(zhì)細(xì)胞活化增殖以及腦內(nèi)炎癥因子TNF-α、IL-1β表達(dá)（P＜0.05）；模型組大鼠癲癇后腦內(nèi)

4、NF-κB活化入核增多，其抑制單位IκB-α及IKK-β下調(diào)失活，α-細(xì)辛醚干預(yù)組大鼠腦內(nèi)NF-κB活化入核減弱，而IκB-α及IKK-β表達(dá)明顯高于模型組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：α-細(xì)辛醚具有確切的抗癲癇作用，且可改善癲癇后大鼠學(xué)習(xí)記憶及認(rèn)知功能；α-細(xì)辛醚可抑制癲癇后大鼠腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞活化和炎癥因子TNF-α、IL-1β表達(dá)；α-細(xì)辛醚可抑制癲癇后大鼠腦內(nèi)NF-κB信號通路的激活。
　　第二部分α-細(xì)辛醚對脂多糖誘

5、導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響
　　目的:研究α-細(xì)辛醚對脂多糖（LPS）誘導(dǎo)大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞免疫炎癥反應(yīng)的影響。
　　方法:原代培養(yǎng)大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞，LPS誘導(dǎo)活化，隨機(jī)分為正常對照組、模型組和不同濃度α-細(xì)辛醚干預(yù)組，免疫熒光觀察小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化， EMSA檢測各組細(xì)胞 NF-κB活化入核情況， Western-blotting法檢測各組細(xì)胞IκB-α、IKK-β及其磷酸化形式的表達(dá)，ElISA法檢測各組炎癥因子IL-1β、

6、TNF-α的變化。
　　結(jié)果：與正常對照組比較，模型組小膠質(zhì)細(xì)胞活化增強(qiáng)，胞內(nèi)NF-κB活化入核增加，IκB-α、IKK-β下調(diào)失活，炎癥因子IL-1β、TNF-α表達(dá)明顯增高（P＜0.05），并在活化后3h時達(dá)到高峰，與模型組相比，不同濃度的α-細(xì)辛醚可抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化，并對胞內(nèi)NF-κB活化入核，IκB-α、IKK-β的失活以及炎癥因子的表達(dá)均有抑制作用（P＜0.05），其作用呈劑量依賴性，且100μg.mL-1α-細(xì)辛醚作