瘦素對小膠質細胞炎癥反應調節(jié)的研究.pdf

1、目的：通過觀察BV2小膠質細胞系多種炎癥介質的表達情況，研究瘦素對于小膠質細胞免疫反應的調節(jié)，并探究JAK2蛋白在瘦素調節(jié)小膠質細胞免疫反應過程中的意義。
　　方法：通過體外模擬中樞系統(tǒng)中小膠質細胞發(fā)生炎癥反應時的狀態(tài)，觀察在瘦素干預下小膠質細胞炎癥因子表達情況，實驗首先通過 CCK-8比色法檢測不同濃度的脂多糖（LPS）對于BV2小膠質細胞增殖率的影響，以選擇出本實驗中LPS的適合濃度，再將 BV2小膠質細胞按完全隨機的方法分成

2、5個小組，每個小組中包含8小瓶培養(yǎng)的BV2小膠質細胞，根據(jù)不同的處理方法將這5個小組的小膠質細胞分別設置為：A組為空白對照組、B組為脂多糖組、C組為瘦素組、D組為脂多糖+瘦素組、E組為瘦素+AG490組。分組后將這5組小膠質細胞進行相應處理24h后，采用流式細胞技術（FCM）檢測小膠質細胞表面膜分子激活指標白細胞共同抗原 CD45、黏附轉移指標白細胞共同抗原 CD54、增殖指標核抗原Ki-67的表達情況。以及利用逆轉錄-聚合酶鏈反應技術

3、（RT-PCR）檢測小膠質細胞凋亡蛋白基因（FasL）、一氧化氮合酶基因（iNOS）、腫瘤壞死因子基因（TNF-α）三種mRNA片段的表達情況。
　　結果：
　　采用CCK-8比色法檢測結果發(fā)現(xiàn)，與空白對照組相比，BV2小膠質細胞在不同劑量的LPS（100ng/ml、500ng/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml）處理培養(yǎng)24h后，BV2小膠質細胞活性呈劑量依賴性降低，5μg/ml和10μg/ml脂多糖對于BV

4、2小膠質細胞活性有明顯抑制作用，且差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而其他三種不同濃度劑量的LPS（100ng/ml、500ng/ml、1μg/ml）對于BV2小膠質細胞活性無明顯抑制作用，且差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　采用FCM技術檢測結果顯示，脂多糖組和瘦素組的白細胞共同抗原CD45和CD54表達量較空白對照組有明顯升高，且差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），瘦素和脂多糖一樣都可以刺激小膠質細胞產(chǎn)生炎性因子。而

5、脂多糖+瘦素組的白細胞共同抗原 CD45和 CD54表達量較脂多糖組有明顯下降，且差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），瘦素降低了脂多糖對于小膠質細胞產(chǎn)生炎性因子的刺激作用。瘦素+AG490組較瘦素組白細胞共同抗原CD45和CD54表達量有所降低，且差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），實驗結果顯示JAK2蛋白的特異性阻斷劑AG490阻斷了瘦素對于小膠質細胞炎癥介質白細胞共同抗原CD45和CD54的表達。而5組中增殖指標核抗原Ki-67的表

6、達量在各組間顯示無明顯差異。
　　采用 RT-PCR技術檢測結果顯示，脂多糖組和瘦素組的細胞凋亡蛋白基因（FasL）、一氧化氮合酶基因（iNOS）、腫瘤壞死因子基因（TNF-α）三種mRNA表達量較空白對照組都有明顯升高，且差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），實驗結果顯示瘦素同脂多糖一樣可以刺激小膠質細胞產(chǎn)生免疫應答反應并刺激炎癥基因的增值表達。脂多糖+瘦素組的細胞凋亡蛋白基因（FasL）、一氧化氮合酶基因（iNOS）、腫瘤壞死因

7、子基因（TNF-α）三種mRAN表達量較脂多糖組有明顯下降，且差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），實驗結果顯示瘦素降低了脂多糖對于小膠質細胞產(chǎn)生免疫應答反應并刺激炎癥基因的增值表達。瘦素+AG490組較瘦素組細胞凋亡蛋白基因（FasL）、一氧化氮合酶基因（iNOS）、腫瘤壞死因子基因（TNF-α）三種 mRNA表達量有所降低，且差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），表明 JAK2蛋白的特異性阻斷劑 AG490阻斷了瘦素對于小膠質細胞產(chǎn)生免

8、疫應答反應。
　　結論：瘦素作用于不同狀態(tài)的小膠質細胞表現(xiàn)的作用不同，瘦素可以激活靜息狀態(tài)的小膠質細胞使其產(chǎn)生炎性反應，而且瘦素能夠抑制脂多糖活化后的小膠質細胞。本次實驗表明了，一方面瘦素能夠刺激小膠質細胞活化，另一方面瘦素又能使脂多糖活化的小膠質細胞轉歸到靜息狀態(tài)。瘦素能夠刺激小膠質細胞，讓小膠質細胞產(chǎn)生多種炎性因子，這一點與脂多糖的作用相似，同時瘦素又能夠使脂多糖刺激活化的小膠質細胞產(chǎn)生的炎性因子減少。此外，實驗結果顯示JAK