小鼠腦缺血時小膠質細胞活化與細胞周期相關蛋白調控的研究.pdf

1、目的：通過觀察小鼠局灶性腦缺血后小膠質細胞活化增殖的規(guī)律和細胞周期相關蛋白cyclin D1和DCDK4的時空表達規(guī)律，探討細胞周期調控與腦缺血后小膠質細胞活化的關系。 方法：采用線栓法制作小鼠局灶性腦缺血/再灌注模型，動物隨機分為假手術組和缺血組，缺血組在缺血40 min后根據不同的再灌注時間分為3h組，5h組，12h組，1d組，3d組和5d組。通過TTC染色和H-E染色確認模型是否成功和腦組織的病理學改變，組織化學染色觀察小

2、膠質細胞活化規(guī)律，免疫組織化學染色觀察cyclin D1和CDK4的表達，采用雙重染色法觀察細胞周期相關蛋白在小膠質細胞，星形膠質細胞和神經元中的表達。 結果： 1．缺血再灌注3h，小膠質細胞在缺血中心區(qū)開始活化，12h后，表達明顯增多(P<0.05)，缺血3d小膠質細胞顯著增多(P<0.01)，聚集在缺血中心區(qū)與半暗帶，以圓形和阿米巴樣為主，5d后，小膠質細胞持續(xù)增加。 2．在假手術組和缺血對側cyclin D

3、1和DCDK4分布較少，缺血3h，在胞核出現(xiàn)，在半暗帶和缺血中心區(qū)散在表達，1d時，cyclin D1表達達高峰，胞核深染，在半暗帶表達為主(P<0.01)，缺血中心區(qū)cyclin D1表達較5h、12h組增多，3d和5d時，cyclin D1表達下降；CDK4的表達規(guī)律同cyclin D1相類似，CDK4在缺血3d達高峰(P<0.01)，主要在半暗帶表達，5d時表達下降。二者表達高峰早于小膠質細胞活化高峰。 3．在小膠質細胞中

4、cyclin D1和CDK4在1d開始在半暗帶表達，3d時表達數量最多，缺血區(qū)和半暗帶均有表達，5d時的表達數量較3d組減少：缺血3d和5d組有部分小膠質細胞為PCNA陽性。 4．神經元中cyclin D1和CDK4的表達在缺血再灌注3h、5h和12h組在半暗帶和缺血區(qū)均有表達，在1d時，NSE與cyclin D1和CDK4在半暗帶共同表達增多，3d和5d組下降。 5．星形膠質細胞在5d組觀察到有少量cyclin D1表