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文檔簡介
1、目的:探討跑臺運(yùn)動(dòng)對大鼠高血脂腦缺血再灌注后海馬區(qū)Ku蛋白和細(xì)胞周期蛋白的作用。
方法:本實(shí)驗(yàn)將SPF級雄性高血脂誘導(dǎo)的Wistar大鼠120只隨機(jī)分為:對照組(n=40),模型組(n=40)、實(shí)驗(yàn)組(n=40)。高血脂模型采用高血脂飼料喂養(yǎng)6周形成高血脂大鼠后。實(shí)驗(yàn)組于建模前15天開始進(jìn)行跑臺運(yùn)動(dòng)20m/min,30min/day,應(yīng)用四血管阻斷法(Pulsinelli4VO法)制備全腦缺血模型,分別于缺血15min再灌注后
2、3h、6h、24h和48h四個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死大鼠,缺血再灌注后24h和48h大鼠在處死前采用水迷宮檢測各組大鼠視空間記憶。各時(shí)間點(diǎn)的標(biāo)本采用蘇木素-伊紅染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)觀察各組大鼠腦組織神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)的變化情況;采用免疫組織化學(xué)染色和免疫印跡蛋白(western-blotting)方法檢測各組大鼠腦組織中Ku70、Ku80、CycinA和CyclinE蛋白的表達(dá)情況。應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)
3、計(jì)分析軟件對所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行重復(fù)設(shè)計(jì)的單因素方差分析,以P<0.05,表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)果:1水迷宮檢測結(jié)果:與對照組比較,模型組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(24h、48h)的潛伏期時(shí)間顯著延長,穿臺次數(shù)顯著減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,實(shí)驗(yàn)組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(24h、48h)的潛伏期時(shí)間顯著縮短而穿臺次數(shù)顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2形態(tài)觀察結(jié)果(HE染色)對照組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞排列整
4、齊,胞漿淡染;模型組與對照組比較3h結(jié)構(gòu)形態(tài)即出現(xiàn)形態(tài)改變,表現(xiàn)為細(xì)胞失去正常結(jié)構(gòu),部分細(xì)胞形態(tài)異常,6h海馬區(qū)可見較多腫脹的神經(jīng)元,間質(zhì)水腫,結(jié)構(gòu)疏松,神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)核固縮、深染,也有部分神經(jīng)元胞核完全消失,形成空泡狀結(jié)構(gòu);24h腦組織神經(jīng)細(xì)胞破壞,可見較多變性壞死的神經(jīng)細(xì)胞,神經(jīng)細(xì)胞呈空泡狀或海綿狀,神經(jīng)元細(xì)胞出現(xiàn)核固縮、碎裂和核仁消失現(xiàn)象,間質(zhì)水腫明顯;48h可見壞死神經(jīng)細(xì)胞,腦組織結(jié)構(gòu)破壞,結(jié)構(gòu)疏松,核膜碎裂、核仁消失,各
5、時(shí)間點(diǎn)中以48h損傷最嚴(yán)重;實(shí)驗(yàn)組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元損傷較模型組明顯減輕,可見壞死的神經(jīng)元減少,間質(zhì)水腫較輕,核固縮和空泡較少。3 Ku70免疫組化和Western blot分析結(jié)果:免疫組化結(jié)果:Ku70免疫組化染色呈棕黃色,定位于細(xì)胞胞漿中,主要表達(dá)在神經(jīng)元細(xì)胞。與對照組比較,模型組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(3h、6h、24h、48h)Ku70蛋白的表達(dá)增加,且24h達(dá)高峰,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,實(shí)驗(yàn)組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(
6、3h、6h、24h、48h)Ku70蛋白的表達(dá)明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Western blot分析結(jié)果:與對照組比較,模型組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(3h、6h、24h、48h) Ku70蛋白的表達(dá)增加,且24h達(dá)高峰,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,實(shí)驗(yàn)組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(3h、6h、24h、48h)Ku70蛋白的表達(dá)明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。4 Ku80免疫組化和Western blot分析
7、結(jié)果:免疫組化結(jié)果:Ku80免疫組化染色呈棕黃色,定位于細(xì)胞胞核中,主要表達(dá)在海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞。與對照組比較,模型組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(3h、6h、24h、48h)Ku80蛋白的表達(dá)明顯增加,且6h達(dá)高峰,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,實(shí)驗(yàn)組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(3h、6h、24h、48h)Ku80蛋白的表達(dá)明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Western blot分析結(jié)果:與對照組比較,模型組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(3h、6h
8、、24h、48h)Ku80蛋白的表達(dá)明顯增加,且6h達(dá)高峰,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,實(shí)驗(yàn)組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(3h、6h、24h、48h)Ku80蛋白的表達(dá)明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。5 CyclinA免疫組化和Western blot分析結(jié)果:免疫組化結(jié)果:CyclinA免疫組化染色呈棕黃色,定位于細(xì)胞胞核中,主要表達(dá)在海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞。與對照組比較,模型組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(3h、6h、24h、48h)
9、CyclinA蛋白的表達(dá)量逐漸增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,實(shí)驗(yàn)組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(3h、6h、24h、48h) CyclinA蛋白的表達(dá)明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Western blot分析結(jié)果:與對照組比較,模型組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(3h、6h、24h、48h)CyclinA蛋白的表達(dá)量逐漸增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,實(shí)驗(yàn)組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(3h、6h、24h、48h)Cy
10、clinA蛋白的表達(dá)明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。6 CyclinE免疫組化和Western blot分析結(jié)果:免疫組化結(jié)果:CyclinE免疫組化染色呈棕黃色,定位于細(xì)胞胞核中,主要表達(dá)在海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞。與對照組比較,模型組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(3h、6h、24h、48h)CyclinE蛋白的表達(dá)逐漸降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,實(shí)驗(yàn)組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(3h、6h、24h、48h) CyclinE蛋白的表
11、達(dá)明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Western blot分析結(jié)果:與對照組比較,模型組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(3h、6h、24h、48h)CyclinE蛋白的表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,實(shí)驗(yàn)組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(3h、6h、24h、48h)CyclinE蛋白的表達(dá)明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:1跑臺運(yùn)動(dòng)可改善全腦缺血再灌注大鼠空間記憶功能。2跑臺運(yùn)動(dòng)可增加Ku蛋白的表達(dá),同
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