中國(guó)棉鈴蟲核型多角體病毒的感染對(duì)宿主細(xì)胞周期和細(xì)胞周期蛋白的影響.pdf

1、我們以HaSNPV——Hz細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),研究桿狀病毒的感染對(duì)昆蟲細(xì)胞周期進(jìn)程和周期蛋白的影響.實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1.正常Hz細(xì)胞周期備個(gè)時(shí)相的分布和時(shí)間間隔;通過(guò)FACS 分析不同步的正常Hz細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)47-53﹪的細(xì)胞處于G<,1>,期;20-27﹪的細(xì)胞處于S期;33-2肌﹪ 的細(xì)胞處于G<,2>/M期;并且沒(méi)有異倍體(>4NDNA)細(xì)胞的出現(xiàn).羥基腺可以將Hz細(xì)胞抑制于細(xì)胞周期的G<,1>期.加入終濃度為60ug/ml的羥基脲作用2

2、4hr后,74﹪的Hz細(xì)胞被抑制于細(xì)胞周期的G<,1>期.通過(guò)細(xì)胞周期抑制劑抑制并釋放細(xì)胞來(lái)測(cè)定細(xì)胞周期各時(shí)相之間的時(shí)間間隔,FACS分析發(fā)現(xiàn)Hz細(xì)胞完成整個(gè)細(xì)胞周期時(shí)間大概為40hr,G<,1>期到S 期的時(shí)間為10hr:S期到G<,2>/M期的時(shí)間為14hr:G<,2>/M期到G<,1>期的時(shí)間為16hr.2.HaSNPV的感染對(duì)Hz細(xì)胞周期進(jìn)程的影響;HaSNPV感染不同步的Hz細(xì)胞,病毒感染后的8hr,處于G<,2>/M期的細(xì)胞

3、數(shù)量開(kāi)始增加,有44﹪ 的細(xì)胞被抑制在G<,2>/M期,這種對(duì)細(xì)胞周期的抑制完成于HaSNPV感染后24hr左右,抑制于G<,2>/M期達(dá)到70﹪ 左右.FACS分析發(fā)現(xiàn)NaSNPV感染24 hr后,出現(xiàn)了 14.3﹪的異倍體(>4NDNA)細(xì)胞;當(dāng)HaSNPV感染72hr 時(shí),異借體(>4NDNA)細(xì)胞的數(shù)量達(dá)到最大值,并且細(xì)胞的異倍體化現(xiàn)象隨著感染時(shí)間延長(zhǎng)越趨明顯.用HaSNPV感染同步于G<,1>期的Hz細(xì)胞,同樣發(fā)現(xiàn)HaSNPV

4、感染可以將細(xì)胞抑制于G<,2>/M期.3.HaSNPV的感要對(duì)Hz細(xì)胞周期蛋白的影響;HaSNPV感染不同步的Hz細(xì)胞,CyclinB<,1>表達(dá)量在病毒感染后的16hr開(kāi)始升高,在感染后的24hr達(dá)到高峰.用HaSNPV感染同步于G<,1>期的Hz細(xì)胞,同樣發(fā)現(xiàn)HaSNPV感染導(dǎo)致CyclinB<,1>表達(dá)量升高.通過(guò)共聚焦激光掃描顯微鏡對(duì)正常Hz細(xì)胞和HaSNPV感染48hr后細(xì)胞中的CyclinB<,1>進(jìn)行了定位,發(fā)現(xiàn)在正常的H