大腸桿菌熱休克蛋白DnaK和DnaJ對(duì)細(xì)胞周期的影響.pdf

1、細(xì)胞周期的準(zhǔn)確調(diào)控對(duì)于細(xì)胞生命活動(dòng)非常重要，熱休克蛋白對(duì)細(xì)胞周期的影響尚未見(jiàn)深入的研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以大腸桿菌熱休克蛋白DnaK和DnaJ為研究對(duì)象，探討熱休克蛋白對(duì)細(xì)胞周期的影響。首先，檢測(cè)△dnaK和△dnaJ突變細(xì)胞的細(xì)胞周期參數(shù)，發(fā)現(xiàn)dnaK基因缺失引起了染色體復(fù)制起始的延遲，而dnaJ的缺失引起了染色體復(fù)制起始的提前。而且，△dnaK和△dnaJ突變體的細(xì)胞大小以及細(xì)胞生長(zhǎng)速度與野生型細(xì)胞也有所差異。在缺失突變體中分別恢復(fù)表達(dá)D

2、naK和DnaJ蛋白能夠使這些表型缺陷得以恢復(fù)。在野生型細(xì)胞中分別過(guò)表達(dá)DnaK和DnaJ蛋白使細(xì)胞周期的各個(gè)參數(shù)與缺失突變體的參數(shù)呈相反趨勢(shì)。通過(guò)測(cè)定單個(gè)細(xì)胞的總蛋白含量和復(fù)制起始蛋白DnaA的含量，發(fā)現(xiàn)△dnaK突變中的這兩個(gè)含量相對(duì)于野生型細(xì)胞都有所減少;在△dnaK突變細(xì)胞中以質(zhì)粒表達(dá)DnaK蛋白時(shí)，總蛋白和DnaA含量與野生型細(xì)胞比差別不大;在野生型細(xì)胞中過(guò)表達(dá)DnaK使總蛋白和DnaA含量都有所提高。而△dnaJ突變、△dn

3、aJ/pdnaJ以及過(guò)表達(dá)DnaJ后，單細(xì)胞的總蛋白和DnaA含量與野生型細(xì)胞相比無(wú)明顯差別。這說(shuō)明DnaK有可能是通過(guò)影響DnaA量來(lái)間接影響染色體復(fù)制起始，而DnaJ可能是通過(guò)其他途徑影響復(fù)制起始。
　　通過(guò)細(xì)菌雙雜交實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)DnaK和DnaJ與核糖體休眠因子YfiA蛋白之間有相互作用。通過(guò)對(duì)基因dnaK和dnaJ點(diǎn)突變發(fā)現(xiàn)了DnaK蛋白的核心氨基酸是位于與核苷酸相互作用功能域上的賴氨酸、組氨酸和精氨酸;DnaJ核心氨基酸為