ISP-1對大鼠肥大腎小球系膜細胞細胞周期調節(jié)蛋白影響的研究.pdf

1、目的：觀察高糖對大鼠腎小球系膜細胞(glomerularmesangialcell，GMC)細胞大小及其細胞外基質(extracellularmatrix，ECM)成分分泌的變化，及其對α-平滑肌肌動蛋白(α-smoothmuscleactin，α-SMA)、細胞周期調節(jié)蛋白(CellCycleRegulatoryProteins，CCRP)表達及其細胞周期時相分布的影響。并探討從冬蟲夏草蟲草菌絲中提取的具有免疫抑制活性的物質--多球殼

2、菌素(myriocin，ISP-1)的干預效應。 方法：參照Fujita及Kluepfel等方法，采用經典的液相色譜法及有機溶劑反復萃取的方式，從人工冬蟲夏草蟲草菌絲中提取ISP-1。利用體外培養(yǎng)大鼠GMC，予以高糖(450mg/dlD-glucose，HG)制造GMC細胞肥大模型，同時以正常糖(100mg/dlD-glucose，NG)組及高滲(350mg/dlD-mannitol+100mg/dlD-glucose，MN)組

3、作為對照，并以HG加ISP-1(450mg/dlD-glucose+100ug/mlISP-1，ISP-1)作為干預組。采用流式細胞術檢測細胞大小(以前向角散射光平均強度表示細胞大小)、細胞周期分布及CyclinD1的表達。GMC中其它CCRP如p21cipl、P27kipl及CyclinE的表達采用Western印跡法檢測。以ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清液中的纖維連接蛋白(FN)、Ⅳ型膠原(ColⅣ)、Ⅲ型前膠原(PCⅢ)、透明質酸(

4、HA)及層粘連蛋白(LN)等ECM的含量，采用細胞免疫組織化學的方法檢測GMC細胞內α-SMA的表達。 結果：高糖組GMC細胞體積較正常糖組及高滲組明顯增大(P＜0.05)，而高滲組與正常糖組相比較無顯著性差異(P＞0.05)，由此可知高糖可導致GMC肥大；正常糖組有一定的CyclinD1、CyclinE、p21cipl、P27kipl及α-SMA表達和ECM的分泌，而高糖組CCRP、α-SMA表達及ECM分泌明顯增加，且隨時間

5、的延長更加明顯，72h達高峰。此外細胞周期分析提示高糖可使GMC停滯于G1期，高糖組G1期細胞比例較正常糖組明顯增高(P＜0.05)。而加入ISP-1后可以明顯改善GMC的肥大、細胞周期停滯和CCRP表達，同時可使ECM分泌和α-SMA的表達顯著減少。而ISP-1組的GMC細胞大小、CCRP和α-SMA的表達以及細胞外基質的分泌的表達與正常糖組相比無顯著性差異(P＞0.05)。 結論：高糖導致GMC發(fā)生雙向生長反應，即細胞先進行

6、自限性增生，后便停止在G1末期發(fā)生肥大，并且導致細胞外基質(ECM)表達增加。CyclinD1和CyclinE表達增加導致GMC細胞增生，而p21cipl、P27kipl表達的上調在GMC細胞肥大和細胞周期停頓中起重要作用。同時高糖導致GMC發(fā)生表型轉化，即α-SMA表達增高與腎纖維化密切相關。ISP-1可能通過改善CCRP、α-SMA的表達、細胞外基質的異常分泌及細胞周期停滯，從而抑制GMC的肥大、細胞表型轉化及ECM分泌。由此推測I