活化蛋白C在脂多糖誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥中的作用及其機(jī)制.pdf

1、背景和目的：宮內(nèi)感染（intrauterine infection）是引起早產(chǎn)兒（preterm birth）的重要病因，也常常引發(fā)一系列神經(jīng)系統(tǒng)的不良結(jié)局如早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷（white matter injury)。早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷的重要病理特點(diǎn)為彌漫性的小膠質(zhì)細(xì)胞活化，少突膠質(zhì)細(xì)胞及其前體細(xì)胞發(fā)育不良從而導(dǎo)致患兒出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)障礙，認(rèn)知、知覺(jué)及行為異常等嚴(yán)重神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥?；罨鞍證（activated protein C）為存在于血漿中

2、的維生素K依賴(lài)性的胰島素樣絲氨酸蛋白酶，除了其重要的抗凝功能外，近年的各種研究表明其具有確切的抗炎、抗凋亡及保護(hù)內(nèi)皮屏障的功能。因此我們推測(cè)活化蛋白C可以某種調(diào)節(jié)機(jī)制作用于活化的小膠質(zhì)細(xì)胞，下調(diào)其炎性因子的表達(dá)從而減輕宮內(nèi)感染引起的腦白質(zhì)損傷。
　　方法：將SPF級(jí)別的出生后24小時(shí)內(nèi)的SD乳鼠斷頭取腦，進(jìn)行小膠質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)。分離純化后的小膠質(zhì)細(xì)胞利用免疫熒光雙標(biāo)法進(jìn)行純度鑒定，達(dá)到95％以上可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。純化后恢復(fù)靜息態(tài)的

3、小膠質(zhì)細(xì)胞分為2組，測(cè)定APC、PAR-1°的安全濃度范圍。小膠質(zhì)細(xì)胞分為6組予以不同的處理：對(duì)照組、LPS組、LPS+APC組、LPS+APC+PAR-1°組、APC組、PAR-1°組，用ELISA法檢測(cè)各組上清中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表達(dá)；用Griess法檢測(cè)各組上清中NO的表達(dá)；用免疫熒光染色顯示各組NF-кB、磷酸化p38-MAPK、的表達(dá)變化；用TUNEL染色顯示各組細(xì)胞的凋亡情況。
　　結(jié)果：成功培

4、養(yǎng)并獲得高純度的原代小膠質(zhì)細(xì)胞；APC可以明顯降低LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞炎性分子（TNF-α、IL-1β、IL-6、NO）的表達(dá)（p＜0.01、p＜0.05、p＜0.05、p＜0.01），在使用PAR-1°阻斷蛋白激酶活化受體1后，APC的抗炎作用有所減弱，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）；免疫熒光顯示LPS+APC組NF-кB、磷酸化p38-MAPK、表達(dá)較LPS刺激組降低，給予PAR-1°阻斷后NF-кB、磷酸化p38-MAPK、表達(dá)