CHIP與誘導(dǎo)型一氧化氮合酶相互作用并誘導(dǎo)其泛素化降解的機(jī)理研究.pdf

1、一氧化氮（nitric oxide，NO）是細(xì)胞內(nèi)重要的信息傳遞分子，作為第二信使和神經(jīng)遞質(zhì)參與細(xì)胞內(nèi)各種生理和病理過(guò)程。適量的NO 有助于免疫反應(yīng)的精細(xì)調(diào)節(jié)，但是過(guò)量的NO 生成會(huì)誘發(fā)多種疾病，包括炎癥，神經(jīng)退行性疾病，心血管疾病和腫瘤的發(fā)生，發(fā)展和轉(zhuǎn)移等。因此，調(diào)節(jié)NO的水平有助于許多疾病的治療。NO 是由三種一氧化氮合酶（nitric oxide synthase，NOS）亞型催化L-精氨酸合成。目前研究較多的NOS 類型是誘導(dǎo)型

2、一氧化氮合酶（inducible nitric oxidesynthase，iNOS），由iNOS 誘導(dǎo)產(chǎn)生的NO 主要參與炎癥反應(yīng)和免疫細(xì)胞對(duì)病原體的防御。鑒于iNOS 是急性炎癥過(guò)激反應(yīng)過(guò)程中過(guò)量誘生NO的主要催化酶，iNOS 已經(jīng)成為分子水平疾病治療的潛在靶標(biāo)。
　　 酶的活性可以通過(guò)影響其合成，催化活性或者降解來(lái)調(diào)節(jié)。對(duì)iNOS 而言，其合成和催化活性的調(diào)節(jié)已經(jīng)有很多報(bào)道，而關(guān)于iNOS 降解途徑的調(diào)節(jié)研究甚少。Musi

3、al 等報(bào)道在HEK293 細(xì)胞和RAW264.7 細(xì)胞中，26S 蛋白酶體是iNOS降解的主要途徑。進(jìn)一步研究證明在HEK293 細(xì)胞和RAW264.7 細(xì)胞中，iNOS可以發(fā)生泛素化并且這種泛素化對(duì)其降解是必須的。但是，iNOS 泛素化和降解途徑的具體機(jī)制（包括效應(yīng)分子）還需要進(jìn)一步探討。
　　 CHIP（carboxyl terminus of HSC70-interacting protein）是一個(gè)分子量為35kDa的

4、胞質(zhì)蛋白，以二聚體形式存在，其氨基酸序列高度保守。CHIP含有三個(gè)結(jié)構(gòu)域：C-端U-box 結(jié)構(gòu)域，N-端TPR 結(jié)構(gòu)域，還有一個(gè)連接C-端和N-端的中間區(qū)域。CHIP通過(guò)TPR 結(jié)構(gòu)域與HSC/HSP70和HSP90 相互作用，而其C-端U-box結(jié)構(gòu)域含有E3 泛素連接酶活性。文獻(xiàn)報(bào)道CHIP可以介導(dǎo)很多分子伴侶的底物發(fā)生蛋白酶體依賴的泛素化降解，如神經(jīng)元型NOS（nNOS），Smad3，生長(zhǎng)因子受體（ErB2），tau，可溶性鳥(niǎo)苷

5、酸環(huán)化酶（sGC），受體酪氨酸激酶（Ron），雌激素受體-α（Erα）等。盡管Jiang 等人證明把CHIP和iNOS 共轉(zhuǎn)染到COS細(xì)胞中，CHIP可以下調(diào)iNOS的蛋白水平，但是CHIP是怎樣下調(diào)iNOS的蛋白水平以及CHIP是否在iNOS 泛素化和降解過(guò)程中起作用并不清楚。
　　 我們的研究發(fā)現(xiàn)iNOS的泛素化和降解依賴于CHIP。過(guò)表達(dá)和RNAi 實(shí)驗(yàn)表明CHIP可以下調(diào)iNOS的蛋白水平，縮短iNOS 蛋白的半衰期，并