人臍帶沃頓膠移植治療大鼠脊髓損傷的實驗研究.pdf

1、脊髓損傷(spinal cord injury,SCI)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一種常見損傷,它的患病率因為機動車事故、暴力、墜落和潛水等因素而逐年增加。SCI能夠?qū)Υ竽X的反射和感覺相關的白質(zhì)和有髓鞘的神經(jīng)纖維產(chǎn)生損害,同時還能導致脊髓中央損傷節(jié)段灰質(zhì)的中間神經(jīng)元和運動神經(jīng)元損害而造成損傷平面以下的運動和感覺功能的喪失。脊髓損傷的病人伴隨著各種并發(fā)癥,包括呼吸衰竭和呼吸道感染、泌尿生殖系統(tǒng)感染和結石、以及褥瘡等。這些并發(fā)癥給患者及家屬帶來了痛苦

2、和沉重的經(jīng)濟負擔。所以任何治療凡是對減輕脊髓損傷癥狀和促進病人功能恢復的都是有益的,在動物實驗中,移植的骨髓間充質(zhì)干細胞能夠促進神經(jīng)的再生和功能恢復。對人類實驗研究來說,移植的間充質(zhì)干細胞對患者的感覺和運動功能都得到很大改善。臍帶沃頓膠來源的干細胞具有來源廣泛、易培養(yǎng)、多向分化等潛能,成為比較新型的種子細胞,本實驗為探討采用活化的沃頓膠移植于脊髓損傷處,通過沃頓膠產(chǎn)生干細胞探討治療脊髓損傷的效果。
　　 方法：細胞的培養(yǎng)、鑒定和

3、組織塊的活化:在無菌條件下取臍帶組織,去掉臍動脈和臍靜脈,將剩余的臍帶沃頓膠剪碎,消化和過濾后,后接種于含10％胎牛血清(fetal bovine serunl,FBS)的DMEN/F12培養(yǎng)基中培養(yǎng)傳代,取培養(yǎng)至第3代的細胞進行流式細胞儀分析檢測細胞表面標記物:CD29、CD34、CD44、CD45、HLA-ABC、HLA-DR。并將激活的貼壁WJ組織塊取出備用。
　　 動物模型的建立及分組:將大鼠隨機分為3組:活化WJ組織塊

4、移植、PBS移植組和對照組,采用脊髓左側(cè)半切的損傷模型,在模型成功后直接進行移植。
　　 組織塊標記和相關檢測指標:將各組大鼠在移植后第1d、3d、1w、2w、3w、4w進行BBB運動功能評分,并在處死前一周每天用5-溴脫氧尿嘧啶(BrdU)腹腔注射,取損傷節(jié)段脊髓做冰凍切片采用免疫熒光染色和免疫組織化學法觀察脊髓組織的病理學改變和細胞遷移及分化情況。并觀察SYN、GFAP和NSE等因子的表達情況。
　　 結果：活化的W

5、J移植組大鼠的BBB(Basso,Beattie,Bresnahan locomotor scales)運動功能評分在4w后明顯高于PBS移植組和對照組,其中活化的WJ移植組和PBS移植組、對照組之間差異顯著(P＜0.05),而PBS移植組和對照組之間差異不明顯(P＞0.05)。
　　 取損傷周圍做脊髓切片的免疫組織化學檢測結果顯示,在損傷的早期1w時,取脊髓損傷部位的組織做切片顯示A組有被BrdU標記的神經(jīng)元前體細胞,而B組和

6、C組則沒有顯示標記的神經(jīng)元前體細胞,其中A組和B組、C組的差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。在損傷早期的2w時,3組的炎癥細胞浸潤較明顯,差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),但隨著時間推移,在4w時A組的炎癥細胞減少明顯多于B組和C組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),B組和C組的差異不明顯無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。而SYN的檢測結果顯示在損傷早期2w時,3組中的SYN表達都比較低,差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),而在4w時,A組的

7、SYN表達量遠高于B組和C組的表達量,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),B組和C組的差異不明顯無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。GFAP和NSE的檢測結果則正好相反,在損傷早期2w時,3組中的GFAP和NSE表達都比較高,差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),而在4w時,A組的GFAP和NSE表達量遠低于B組和C組的表達量,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),B組和C組的差異不明顯無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 結論：