臍帶源與骨髓源干細胞移植治療大鼠脊髓損傷的療效比較.pdf

1、目的：脊髓損傷后治療修復(fù)的研究一直是神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域的熱點和難點。近年來，間充質(zhì)干細胞在神經(jīng)組織的修復(fù)、再生和功能重建中所起的促進作用日益引起關(guān)注。骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)、臍帶間充質(zhì)細胞等均已被作為細胞來源用于脊髓損傷的神經(jīng)修復(fù)，并顯示其有促進神經(jīng)再生及改善動物神經(jīng)恢復(fù)的功能。但作為間充質(zhì)干細胞(MSCs)經(jīng)典來源的骨髓組織移植效果不盡如人意，可能由于其隨年齡老化而致干細胞含量及其增殖能力顯著降低。因此，尋找新的MSCs來源有著重要

2、意義。我們最近從易于獲得、組織來源上較為原始的人臍帶組織中分離的MSCs，它的優(yōu)勢在于：①取材方便，易于獲得：②無倫理和道德等方面的障礙；③分離得到的細胞形態(tài)、表型相對均一；④臍帶內(nèi)的MSCs含量高，且細胞增殖能力穩(wěn)定，可在短時間內(nèi)獲得足夠的細胞；⑤人臍帶間充質(zhì)干細胞(HUCMSCs)不表達HLA-DR分子，免疫源性較弱。本研究旨在觀察HUCMSCs和大鼠BMSCs移植到大鼠脊髓損傷模型后神經(jīng)功能恢復(fù)的情況和移植后的免疫排斥反應(yīng)，為細胞

3、移植尋找一種新型的具有良好應(yīng)用前景的細胞來源提供理論依據(jù)，進而為其在脊髓損傷治療中應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1．獲取健康、足月、剖腹產(chǎn)胎兒臍帶，采用胰酶消化法獲取HUCMSCs。
　　 2．選取大鼠（約150克，雌雄不限），無菌條件下分離股骨脛骨，用密度梯度離心結(jié)合貼壁培養(yǎng)法分離純化大鼠BMSCs。
　　 3．選取同一批次的SD大鼠40只。采用隨機數(shù)字表法分成3組：臍帶間充質(zhì)干細胞移植組16只、

4、骨髓間充質(zhì)干細胞移植組16只和PBS組8只。采用脊髓半切手術(shù)制作大鼠脊髓損傷模型，損傷后對臍帶間充質(zhì)干細胞移植組進行HUCMSCs移植，對骨髓間充質(zhì)干細胞移植組行大鼠BMSCs移植，對PBS組移植同等劑量的PBS。通過BBB評分對各組動物的術(shù)后恢復(fù)進行評估比較。抽血測定移植后3組動物不同時間點（移植后一周、一個月、兩個月及三個月）血中IL-2及IL-10的水平，來對比各組動物移植后全身免疫排斥反應(yīng)的情況；并通過免疫組化的方法檢測移植局部

5、病理切片CD3+細胞浸潤的情況，對比移植局部移植局部免疫排斥反應(yīng)的情況。
　　 結(jié)果：
　　 1．大鼠BMSCs具有與HUCMSCs相似的生長周期與規(guī)律，但增殖與分化速度明顯慢于HUCMSCs，穩(wěn)定性與后者相比較差。
　　 2．在移植后一周、一個月、兩個月及三個月時，我們檢測到干細胞移植組各個時間點大鼠靜脈血中Ⅱ-2水平較PBS組明顯升高，Ⅱ-10水平較對照組明顯下降，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

6、　　 3．大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞移植組在移植后一周、一個月、兩個月及三個月時大鼠靜脈血中Ⅱ-2水平較人臍帶間充質(zhì)干細胞移植組明顯升高，Ⅱ-10水平較對照組明顯下降，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4．三組在急性期（細胞移植后1周）移植局部均有大量CD3+細胞浸潤。而移植的慢性期（細胞移植后3個月）大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞移植組仍存在大量CD3+細胞浸潤，與其它兩組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)