載脂蛋白E基因多態(tài)性與星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷后興奮性氨基酸變化的實驗研究.pdf

1、目的：探討載脂蛋白E(apolipoprotein E,蛋白:apoE,基因:APOE)基因多態(tài)性與星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷后興奮性氨基酸變化的關(guān)系。
　　 方法：提取APOE敲除鼠新生2 d內(nèi)乳鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞,并以GFAP-FITC免疫熒光法對所獲細(xì)胞進(jìn)行鑒定。脂質(zhì)體介導(dǎo)重組體pEGFP-N1-APOEε2,pEGFP-N1-APOEε3,pEGFP-N1-APOEε4分別轉(zhuǎn)染入星形膠質(zhì)細(xì)胞中,對轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞進(jìn)行RT-PCR鑒

2、定該基因在細(xì)胞中的表達(dá),熒光顯微鏡觀察該基因的亞細(xì)胞定位及轉(zhuǎn)染效率,Westerblot檢測APOE蛋白的表達(dá)。制備3種基因型星形膠質(zhì)細(xì)胞劃傷模型,采用氨基酸分析儀分別測其中氨基酸的含量,流式細(xì)胞儀(FCM)檢測細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)果：星形膠質(zhì)細(xì)胞劃傷后谷氨酸(Glu)和天冬氨酸(Asp)的釋放較早,在劃傷后30分鐘即達(dá)到高峰,APOEε4型顯著高于APOEε2、APOEε3型在傷后30、60min(P＜0.05)。細(xì)胞早期凋亡