肺炎克雷伯桿菌肺炎老齡大鼠JAK-STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)變化與毒素清的保護(hù)作用.pdf

1、肺炎克雷伯桿菌為老年人肺炎及院內(nèi)感染的主要致病菌之一，TNF-α、IL-1、IL-6參與了肺炎的病理生理過程，JAK/STAT信號通路與TFN-α、IL-1、IL-6的釋放、放大密切相關(guān)。因此，本課題通過研究肺炎克雷伯桿菌肺炎模型大鼠肺組織炎癥介質(zhì)的變化及JAK/STAT信號通路的異常，以揭示毒素清顆粒治療老年肺炎的作用機(jī)制。 目的：觀察肺組織細(xì)胞因子及JAK/STAT表達(dá)在老齡大鼠肺炎克雷伯桿菌肺炎中的變化，揭示肺炎克雷伯桿菌

2、肺炎老齡大鼠肺臟損傷的特點及分子生物學(xué)機(jī)制，評價中藥復(fù)方毒素清顆粒的保護(hù)作用及作用機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。 方法：SD青年大鼠(5～6月齡)25只，SD老齡大鼠(20～22月齡)90只，均為清潔級，雄性。按體重隨機(jī)分組，青年大鼠分為對照組和模型組，青年對照組10只，青年模型組15只，于取材前生理鹽水灌胃5天(3ml·d-1)。老齡大鼠分為對照組、模型組、洛美沙星組、毒素清組、AG490組、RPM組、AG490+毒素清組、RP

3、M+毒素清組，其中老齡模型組20只，其余每組各10只。對照組和模型組處理同青年大鼠。洛美沙星組、毒素清組和RPM組，取材前分別洛美沙星、毒素清和RPM灌胃5天。AG490組造模前0.5h皮下注射AG490。AG490＋毒素清組取材前毒素清灌胃5天，于造模前0.5h皮下注射AG490。RPM＋毒素清組取材前RPM和毒素清灌胃5天。給藥劑量按動物體型系數(shù)比率換算劑量(洛美沙星：40mg·kg-1·d-1，毒素清：5.7g·kg-1·d-1，

4、RPM：0.4mg·kg-1·d-1，AG490:8mg·kg-1)。肺炎模型采用氣管插管法復(fù)制，造模后48h取材。測定造模后24h、48h外周血白細(xì)胞計數(shù)和中性粒細(xì)胞比率；測定腹主動脈血血?dú)夥治鯬aO2、PaCO2；光鏡、電鏡下觀察肺組織病理形態(tài)學(xué)改變；采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測肺臟中IL-1、IL-6、TNF-α、JKA2、STAT1、STAT3和STAT5的表達(dá)水平；采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測肺臟JKA2mRN

5、A的表達(dá)。 結(jié)果： 1.支氣管肺泡灌洗液(BALF)菌屬鑒定結(jié)果示：均檢出肺炎克雷伯桿菌，確定為肺炎克雷伯桿菌肺炎。 2.外周血白細(xì)胞計數(shù)和中性粒細(xì)胞比率變化：青年、老齡模型組24h、48h白細(xì)胞計數(shù)和中性粒細(xì)胞比率均分別較青年、老齡對照組升高顯著(P<0.01)；各藥物組24h、48h自細(xì)胞數(shù)和中性粒細(xì)胞比率較老齡模型組均顯著降低(P<0.01);各藥物組之間無顯著差異(P>0.05)。 3.動脈血氧分

6、壓和二氧化碳分壓比較：青年、老齡模型組大鼠動脈血PaO2降低和PaCO2升高分別較青年、老齡對照組顯著(P<0.01, P<0.05)；且老齡模型組較青年模型組PaO2降低和PaCO2升高顯著(P<0.05)。與老齡模型組比較，洛美沙星組PaO2升高和毒素清組PaCO2降低、PaO2升高均顯著(P<0.01)；毒素清組PaCO2降低較洛美沙星組顯著(P<0.05)。 4.肺組織含水量：青年、老齡模型組肺組織含水量分別較青年、老齡

7、對照組升高顯著(P<0.05，P<0.01)，其中老齡模型較青年模型升高顯著(P<0.05)。各藥物組肺組織含水量較老齡模型組顯著降低(P<0.05)。 5.肺組織病理形態(tài)學(xué)觀察：青年對照組為正常肺組織，老齡對照組肺組織可見肺泡上皮有退行性改變；青年模型組肺組織可見充血、水腫；老齡模型組肺泡上皮有退行性改變，見有纖維增生，各級支氣管慢性炎癥明顯，其充血、水腫較青年模型組嚴(yán)重。與老齡模型組比較，各藥物組病理損傷改善明顯。

8、6.肺組織IL-1、IL-6、TNF-α表達(dá)的變化6.1肺組織IL-1的表達(dá)：青年、老齡模型組大鼠肺組織IL-1的陽性細(xì)胞數(shù)及平均光密度均分別高于青年、老齡對照組(P<0.01)。老齡模型組IL-1陽性細(xì)胞數(shù)較青年模型組升高顯著(P<0.01)。各藥物組肺組織IL-1的陽性細(xì)胞數(shù)、平均光密度較老齡模型組顯著降低(P<0.01)6.2肺組織IL-6的表達(dá)：青年、老齡模型組大鼠肺組織IL-6的陽性細(xì)胞數(shù)及平均光密度均分別高于青年、老齡對照組

9、(P<0.01)；各藥物組肺組織IL-6陽性細(xì)胞數(shù)較老齡模型組顯著減少(P<0.01)。 6.3肺組織TNF-α表達(dá)：青年、老齡模型組大鼠肺組織TNF-α的平均光密度及陽性細(xì)胞數(shù)均分別顯著高于青年、老齡對照組(P<0.01)；各藥物組肺組織TNF-α的陽性細(xì)胞數(shù)、平均光密度較老齡模型組顯著降低(P<0.01)。 7.肺組織中JAK2、STAT1、STAT3及STAT5表達(dá)的變化7.1肺組織中JAK2的表達(dá)：老齡模型組肺組

10、織JAK2的陽性細(xì)胞數(shù)、平均光密度較老齡對照組顯著升高(P<0.01)；與老齡模型組比較，毒素清組、AG490組、AG490＋毒素清組、RPM＋毒素清組JAK2的陽性細(xì)胞表達(dá)數(shù)、平均光密度顯著降低(P<0.01)，RPM組JAK2的陽性細(xì)胞數(shù)顯著減少(P<0.01)。 7.2肺組織中STAT1的表達(dá)：老齡模型組肺組織STAT1的陽性細(xì)胞數(shù)、平均光密度較老齡對照組顯著升高(P<0.01)；各藥物組STAT1的陽性細(xì)胞數(shù)較老齡模型組

11、顯著減少(P<0.01)，AG490組、RPM組、AG490＋毒素清組、RPM＋毒素清組STAT1的平均光密度較老齡模型組顯著降低(P<0.01)。 7.3肺組織中STAT3的表達(dá)：老齡模型組肺組織STAT3的陽性細(xì)胞數(shù)、平均光密度較老齡對照組顯著升高(P<0.01)；各藥物組STAT3的陽性細(xì)胞數(shù)、平均光密度較老齡模型組顯著降低(P<0.01)。 7.4肺組織中STAT5的表達(dá)：老齡模型組肺組織STAT5的陽性細(xì)胞數(shù)、

12、平均光密度較老齡對照組顯著升高(P<0.01)；各藥物組STAT5的陽性細(xì)胞數(shù)、平均光密度較老齡模型組顯著降低(P<0.01)。 8.肺組織JAK2mRNA表達(dá)水平的變化：老齡模型組JAK2mRNA表達(dá)較老齡對照組顯著升高(P<0.01)；除了洛美沙星組，各藥物組JAK2mRNA表達(dá)較老齡模型組顯著降低(P<0.05，P<0.01)。 結(jié)論： 1.通過氣管插管注入菌液法成功復(fù)制大鼠克雷伯桿菌肺炎模型，老年肺炎的肺