毒素清對肺炎克雷白桿菌肺炎老齡大鼠多器官損傷的保護作用.pdf

1、目的：老年肺炎是老年人常見的感染性疾病，容易引發(fā)老年多器官損傷，是導(dǎo)致老年人多器官功能障礙綜合征和多器官功能衰竭的主要疾病，也是老年人死亡的主要原因之一。因此，本課題以老齡大鼠為研究對象，研究克雷白桿菌肺炎多器官損傷模型大鼠細胞因子和炎癥介質(zhì)的變化，以探討其病理生理學(xué)機制，揭示毒素清對肺炎所致多器官損傷保護作用的機制，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。 方法：SD青年大鼠(5～6月齡)28只，老齡大鼠(20～22月齡)56只，均為清潔級，雄性

2、。按體重隨機分組，青年大鼠分為對照組和模型組，每組各14只，造模前1天及造模始灌胃生理鹽水，每日1次，造模第6天取材。老齡大鼠分為對照組、模型組、左氟沙星組、毒素清組，每組各14只。對照組和模型組處理同青年大鼠；左氟沙星組、毒素清組，造模前1天及造模始灌胃，給藥劑量按動物體型系數(shù)比率換算劑量(左氟沙星22.19mg·kg<'-1>·d<'-1>、毒素清3.99g·kg<'-1>·d<'-1>)。肺炎引起多器官損傷模型采用氣管插管法復(fù)制，

3、造模第6天取材。測定外周血和肺泡灌洗液中WBC和中性粒細胞計數(shù)；測定血清生物化學(xué)指標、IL-1和TNF-α：光鏡下觀察肺、心、肝、腎和小腸組織病理形態(tài)學(xué)改變；采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測肺臟中IL-1、TNF-α和MIP-2的表達水平；采用原位雜交技術(shù)檢測肺臟MIP-2mRNA表達水平。 結(jié)果： 1 白細胞和中性粒細胞計數(shù)：青年和老齡模型組2d、6d外周血白細胞和中性粒細胞及6d肺泡灌洗液中白細胞和中性粒細胞分別高于青年和老

4、齡對照組(P<0.01)；毒素清組和左氟沙星組2d、6d外周血白細胞和中性粒細胞及6d肺泡灌洗液中白細胞和中性粒細胞分別低于老齡模型組(P<0.01)；老齡對照組外周血及肺泡灌洗液中白細胞和中性粒細胞較青年對照組降低(P<0.05)。與2d相比，青年和老齡模型組6d外周血白細胞和中性粒細胞計數(shù)分別高于青年和老齡模型組(P<0.01)；毒素清組和左氟沙星組6d外周血白細胞和中性粒細胞計數(shù)低于老齡模型組(P<0.01)。 2肺組織勻

5、漿的細菌菌落計數(shù)：青年和老齡模型組菌落計數(shù)分別高于青年和老齡對照組(P<0.01)；老齡模型組菌落計數(shù)高于青年模型組(P<0.01)；毒素清和左氟沙星組菌落計數(shù)明顯低于老齡模型組(P<0.01)。 3 血清生物化學(xué)指標(ALT、AST、BUN、CR和LDH)：青年和老齡模型組血清生物化學(xué)指標分別高于青年和老齡對照組(P<0.01)；老齡模型組較青年模型組升高更為明顯(P<0.05)；毒素清和左氟沙星組較老齡模型組顯著降低(P<0

6、.01)。 4 肺、心、小腸組織含水量：青年和老齡模型組分別高于青年和老齡對照組(P<0.01)，老齡對照組則低于青年對照組(P<0.01)；毒素清和左氟沙星組則低于老齡模型組(P<0.01)。 5 各組織病理改變及損傷分級比較5.1 各組織普通病理形態(tài)學(xué)觀察①肺臟：青年對照組為正常肺組織，老齡對照組肺組織可見肺泡上皮有退行性改變；青年模型組肺組織可見充血、水腫；老齡模型組肺肺泡上皮有退行性改變，見有纖維增生，有少部分被破壞，各

7、級支氣管慢性炎癥明顯，其充血、水腫較青年模型組嚴重。與老齡模型組比較，毒素清和左氟沙星組病理損傷改善明顯。②心臟：青年對照組為正常心肌組織；老齡對照組心肌組織基本正常，可見心肌纖維排列不整齊；青年和老齡模型組心肌纖維排列紊亂，間質(zhì)毛細血管及血管擴張及充血，偶見壞死，而以老齡模型組更為嚴重。毒素清和左氟沙星組多數(shù)心肌纖維接近正常，部分間質(zhì)中毛細血管有輕度擴張充血。③肝臟：青年和老齡對照組可見正常的肝細胞組織；青年和老齡模型組肝細胞可見點狀

8、壞死，出現(xiàn)不同程度的淤血，肝細胞出現(xiàn)濁腫變性，而且老齡模型組較青年模型組嚴重。毒素清組和左氟沙星組肝組織的淤血有所減輕，肝細胞變性得到一定改善，壞死消失。④腎臟：青年和老齡對照組為正常的腎臟組織；青年和老齡模型組可見腎間質(zhì)毛細血管擴張充血、腎小管上皮細胞變性和蛋自滲出，老齡模型組更為嚴重。毒素清組和左氟沙星組的上述病理改變均得到改善。⑤小腸：青年和老齡對照組可見正常的小腸組織；老齡模型組小腸組織大部分被破壞，其病變累及黏膜下層：黏膜多處

9、脫落，黏膜下層、肌層、漿膜層均被大量的中性粒細胞、淋巴細胞及漿膜細胞浸潤，病理改變較青年模型組嚴重。毒素清組和左氟沙星組與老齡模型組比較均有明顯改善。 肺臟電鏡下觀察：青年對照組氣管、支氣管粘膜上皮細胞纖毛排列整齊、無脫落，細支氣管上皮細胞無變性；老齡對照組細支氣管上皮細胞部分退化變性；青年模型組和老齡模型組氣管上皮細胞表面局部微絨毛脫落，氣管、支氣管上皮纖毛粘連、倒伏，纖毛脫落明顯，線粒體部分嵴和膜溶合消失，嗜鋨性板層小體大部

10、分排空，肺泡腔內(nèi)有單核巨噬細胞。細支氣管上皮細胞表面纖毛變細，排列稀疏。細支氣管、呼吸細支氣管上皮細胞之間間隙增寬，上皮細胞輕度變性，杯狀細胞分泌明顯增加。胞質(zhì)內(nèi)的微絲明顯排列成束狀。上皮細胞間隙明顯增寬，細胞核染色質(zhì)明顯邊集，而以老齡模型組纖毛脫落、上皮細胞變性更為明顯。毒素清和左氟沙星組可見氣管上皮細胞表面局部微絨毛脫落減少，氣管、支氣管上皮纖毛粘連、倒伏，纖毛脫落明顯明顯改善，偶見線粒體部分嵴和膜溶合消失，肺泡腔內(nèi)可見紅細胞和單核

11、巨噬細胞。 5.2 各臟器損傷病理分級比較：青年和老齡模型組分別較對青年和老齡對照組損傷嚴重(P<0.01)；老年模型組較青年模型組更為嚴重(P<0.01)；毒素清和左氟沙星組損傷程度較老齡模型組明顯減輕(P<0.01)。 6 各組大鼠細胞因子的改變： 6.1血清IL-1和TNF-a水平的變化：青年和老齡模型組IL-1和TNF-a分別高于青年和老齡對照組(P<0.05，P<0.01)；老齡模型組IL-1和TNF-

12、a高于青年模型組(P<0.05)；毒素清和左氟沙星組IL-1和TNF-a則低于老齡模型組(P<0.05，P<0.01)。 6.2肺組織IL-1、TNF-a和MIP-2表達的變化：青年和老齡模型組IL-1、TNF-α和MIP-2的表達分別較青年和老齡對照組顯著(P<0.01)；老年模型組IL-1、TNF-α和MIP-2較青年模型組更為顯著(P<0.05)；毒素清和左氟沙星組IL-1、TNF-α和MIP-2的表達低于老齡模型組(P<

13、0.01)。 7肺組織MIP-2 mRNA的表達：青年和老齡模型組MIP-2 mRNA的表達分別較青年和老齡對照組顯著增強(P<0.01)；老齡模型組較青年模型組MIP-2 mRNA的表達增強(P<0.05)；毒素清組和左氟沙星組MIP-2 mRNA的表達較老齡模型組表達顯著減低(P<0.01)。 結(jié)論： 1 肺炎可引起多器官損傷，而老年肺炎所引發(fā)的多器官損傷較青年更為嚴重，其病理變化可能與增齡因素有關(guān)。