α-硫辛酸對大鼠重癥急性胰腺炎并發(fā)多器官損傷的保護作用.pdf

1、急性胰腺炎(acute pancreatitis，AP)是一種特殊類型的急腹癥，其起病急，病情進(jìn)展迅速而且常在早期就并發(fā)多系統(tǒng)臟器功能不全(MODS)，從而成為AP的主要死亡原因。Bank等提出急性胰腺炎病程中若任何一胰外臟器受累，則死亡率＞40％，其中早期以肺、腎、心受累最為重要，而后期則以肝衰竭死亡率最高。在AP的發(fā)病機制中細(xì)胞因子-炎癥介質(zhì)學(xué)說和氧化應(yīng)激學(xué)說是研究的熱點。細(xì)胞因子-炎癥介質(zhì)學(xué)說認(rèn)為，在AP發(fā)生過程中，白細(xì)胞過度激活

2、導(dǎo)致大量細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)釋放，促發(fā)瀑布樣級聯(lián)效應(yīng)，造成全身性炎癥反應(yīng)綜合癥(SIRS)，引起胰腺及胰外器官損害。而氧化應(yīng)激是在機體內(nèi)活性氧生成和抗氧化物質(zhì)失衡狀態(tài)下，直接或間接通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路引起細(xì)胞的損傷，從而引起胰腺炎與胰腺外器官的損傷。在AP的過程中，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)的活力下降，丙二醛(malondialdehyde，MDA)的含量升高，并且在炎癥應(yīng)答過程中，致炎因子和氧化應(yīng)激發(fā)

3、揮協(xié)同作用。細(xì)胞間粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)與血管細(xì)胞間粘附分子-1(vascular cell adhesion molecular-I，VCAM-1)均屬于免疫球蛋白超家族(IGSF)成員，它們參與調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)、細(xì)胞和組織的分化和發(fā)育、免疫應(yīng)答反應(yīng)等。其表達(dá)受許多炎癥介質(zhì)影響。它們對于白細(xì)胞粘附及白細(xì)胞經(jīng)過內(nèi)皮細(xì)胞遷移到組織的過程具有重要的意義。 A-硫辛酸(α-

4、Lipoic acid，ALA)是近年來新發(fā)現(xiàn)的新型的抗氧化劑，在脂溶性及水溶性環(huán)境下都能溶解。其脂溶性可使它減少細(xì)胞膜上的自由基，如清除脂肪過氧化物：其水溶性則使它能夠與細(xì)胞液接觸，有效地清除源于線粒體的自由基。而ALA既能中和氧自由基，減輕脂質(zhì)過氧化損傷：又能抑制細(xì)胞粘附分子等炎癥細(xì)胞的釋放，因此從理論上，對AP具有保護作用。 目的： 本研究通過建立AP模型，并施與ALA干預(yù)，觀察大鼠胰腺、肝、肺、腎組織病理學(xué)變化，

5、組織中SOD、MDA含量以及組織中ICAM-1、VCAM-1的表達(dá)情況，探討其在AP炎癥反應(yīng)中的保護作用，探討ALA對實驗性AP并發(fā)多器官損傷的治療作用及機制。 方法： 1.動物模型的制備：選取wistar雄性大鼠，以10％水合氯醛腹腔注射麻醉，取上腹正中作切口進(jìn)入腹腔，用4號加工鈍頭頭皮靜脈針于十二指腸乳頭附近逆行插入胰膽管，以0.2ml/min速度注入3.5％?；悄懰徕c(0.1ml/100g)，推藥后用無創(chuàng)血管夾夾住

6、胰膽管入十二指腸處，觀察10min，去除血管夾，關(guān)腹。 2.實驗分組：將雄性wistar大鼠54只，隨機分為假手術(shù)組(SO group，n=18)、AP模型組(AP group，n=18)、AP+α-硫辛酸治療組(AP+ALA group，n=18)，后又以不同時間點3h、6h、12h分為三個亞組，每個亞組為6只大鼠其中AP+ALA組于造模后不同時間點腹腔內(nèi)注射ALA 1mg/kg。 3 生化指標(biāo)測定：取血清樣本，采用全自動血清

7、生化分析儀檢測血清淀粉酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、尿素、肌酐，由河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院生化室協(xié)助測定。 4 胰腺、肝、肺、腎組織學(xué)檢查：采用石蠟切片，HE染色。 5 SOD活力及MDA含量測定：取肝、肺、腎組織制成組織勻漿，用化學(xué)比色法測定，具體操作按南京建成生物工程研究所提供的測試盒說明書進(jìn)行。 6 ICAM-1和VCAM-1免疫組織化學(xué)染色：脫蠟至水，用3％過氧化氫孵育15min，抗原熱修復(fù)后，封閉一抗4℃過夜，陰性對照用

8、PBS代替一抗。先后滴加二抗、三抗各30min，后用3,3-二氨基苯聯(lián)胺(DAB)顯色，復(fù)染后封片。以細(xì)胞漿內(nèi)呈現(xiàn)黃褐色顆粒為陽性表達(dá)。 結(jié)果： 1.大鼠胰腺、肝、肺、腎的病理學(xué)變化：肉眼和光鏡所見SO組組織結(jié)構(gòu)始終大致正常； AP模型制作成功后，肉眼可以看到胰腺顏色出現(xiàn)出血壞死，有大量皂化斑形成，胃腸脹氣明顯，腹腔內(nèi)大量血性腹水。病理學(xué)觀察：AP組胰腺組織出血壞死、大量炎癥細(xì)胞浸潤；大鼠肝組織可見炎細(xì)胞浸潤，肝小葉紊亂

9、失去正常結(jié)構(gòu)；肺組織細(xì)胞腔擴大、肺泡壁斷裂，有的出現(xiàn)肺大泡，肺泡內(nèi)伴有滲出及少量肺出血，肺組織可見炎細(xì)胞浸潤；腎小球淤血、腎小管上皮水腫、間質(zhì)內(nèi)炎細(xì)胞浸潤；而AP+ALA組較AP組的組織結(jié)構(gòu)破壞相對較輕。 2.大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、尿素、肌酐的變化：在各時間點，SO組無明顯變化，AP組及AP+ALA組與SO組比較均顯著升高(P＜0.01)，AP+ALA組較AP組顯著降低(P＜0.01)。 3 SOD活力的變化：大鼠肝、肺、腎中SO

10、組SOD活力在各時間點均無明顯差異，與SO組相比，AP組呈顯著性降低(P＜0.01)，AP+ALA組則明顯升高降低的SOD活力(P＜0.05)。 4 MDA含量的變化：各大鼠肝、肺、腎組織MDA含量在SO組各時間點無明顯變化，而在AP組各個時間點MDA含量均明顯升高(P＜0.01)，AP+ALA組中MDA含量明顯下降，與AP組相比呈顯著性差異(P＜0.05)。 5 ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)：灰度值檢測結(jié)果顯示：S

11、O組肝、肺、腎組織中兩者幾乎沒有表達(dá)；AP組在肝細(xì)胞、肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞以及腎小管內(nèi)皮細(xì)胞上有較強的表達(dá)，呈棕黃色顆粒；AP+ALA組則表達(dá)明顯減弱，呈弱陽性。 結(jié)論： 1.應(yīng)用3.5％牛磺膽酸鈉胰膽管逆行注射方法制造大鼠重癥急性胰腺炎模型，大鼠出現(xiàn)胰腺組織壞死、出血，皂化斑形成，鏡下見胰腺組織壞死、出血、大量炎細(xì)胞浸潤，同時大鼠出現(xiàn)肝臟、肺臟、腎臟損傷。檢測血清淀粉酶、ALT、肌酐、尿素氮等指標(biāo)，與SO組相比，在AP組