川芎嗪對大鼠重癥急性胰腺炎腎臟損傷保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:觀察大鼠重癥急性胰腺炎(SAP)治療前后大鼠血清超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、腫瘤壞死因子(TNF-α)、血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、血清淀粉酶(AMY)水平的變化；觀察胰腺、腎臟組織的細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2的表達(dá),以研究川芎嗪對大鼠SAP腎損傷保護(hù)機(jī)制。
　　 方法:雌性SD大鼠45只,體重200-250g,隨機(jī)分為正常組(N組)、重癥胰腺炎組(P組)、川芎嗪治療組(C組)。每一組

2、再隨機(jī)分為12h、24h、48h三個(gè)時(shí)間段。術(shù)前大鼠行腹腔注射麻醉,麻醉滿意后,予消毒鋪巾,逐層開腹,暴露胰腺,以胰管走行為解剖定位標(biāo)志找到膽管匯入十二指腸乳頭處。正常組只進(jìn)行開腹和牽拉腸壁兩種侵襲性操作,重癥胰腺炎組造模成功后將生理鹽水(10ml／kg)從大鼠尾靜脈注入,川芎嗪治療組造模成功后將川芎嗪注射液(200mg／kg)從大鼠尾靜脈注入。用SOD放射性125I標(biāo)記放免試劑盒及MDA硫代巴比妥酸法(TBA法)試劑盒檢測血清超氧化物

3、岐化酶及丙二醛。用全自動生化分析儀測定BUN、Cr、AMY；用TUNEL法檢測腎臟細(xì)胞凋亡指數(shù)；用免疫組化和免疫印跡法檢測腎臟Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá),用SPASS16.0軟件分析所有檢測結(jié)果,行方差分析。
　　 結(jié)果:1.胰腺的病理改變:在大體形態(tài)上,正常組腹腔內(nèi)未見滲液,胰腺外觀未見充血水腫,胰周組織無粘連。重癥胰腺炎組12h時(shí)大鼠可見少量血性腹水,胰腺色澤淡紫色,充血水腫,局部壞死出血,大網(wǎng)膜、腸系膜、胰腺周圍少許脂肪

4、皂化；24h時(shí)可見較多紅色血性腹水。胰腺色澤暗褐色,與周圍組織部分粘連,大網(wǎng)膜、腸系膜、胰腺周圍可見較多脂肪皂化；48h時(shí)可見大量暗紅色渾濁腹水,大量壞死、出血,大片脂肪皂化。川芎嗪治療組大鼠腹腔內(nèi)也有腹水生成,為血性滲液,但腹水量與重癥胰腺炎組相比較明顯減輕。胰腺也可見充血水腫,但范圍與重癥胰腺炎組相比明顯縮小。光鏡下觀察:正常組胰腺葉及小葉間隔正常,細(xì)胞形態(tài)正常,周圍間質(zhì)無炎細(xì)胞浸潤。重癥胰腺炎組12h時(shí)可見胰腺葉及小葉間隔增寬,灶

5、性壞死、出血,間質(zhì)少量炎細(xì)胞浸潤；24h時(shí)胰腺損傷較前加重,胰腺葉及小葉間隔疾進(jìn)一步增寬,中量的間質(zhì)細(xì)胞浸潤,胰腺腺泡腫脹,部分壞死、出血。48h時(shí)胰腺損傷程度已經(jīng)極為嚴(yán)重,表現(xiàn)為腺泡細(xì)胞嚴(yán)重腫脹,伴有大片壞死、出血,部分小葉結(jié)構(gòu)完全無法辨認(rèn)。川芎嗪治療組在胰腺腫脹壞死程度、胰周間質(zhì)細(xì)胞浸潤程度等各項(xiàng)指標(biāo)上與同時(shí)段重癥胰腺炎組比較均有減輕。2.腎臟的病理變化:肉眼觀察正常組大鼠腎臟無充血水腫,無出血點(diǎn),腎周間隙未見滲液,腎周脂肪無皂化。

6、重癥胰腺炎組12h時(shí)腎臟外觀輕度水腫,體積略增大；24h時(shí)腎臟充血水腫較前加重,并可見散在出血點(diǎn)；48h時(shí)腎臟充血水腫繼續(xù)加重,色澤呈紫褐色,可見大量出血點(diǎn),包膜緊張,部分腎周脂肪皂化。川芎嗪治療組隨時(shí)間延長逐漸出現(xiàn)腎臟充血水腫繼而出血點(diǎn)形成,腎周間隙逐漸出現(xiàn)滲液。但與同時(shí)段重癥胰腺炎組比較程度較輕。光鏡下檢查:正常組大鼠腎臟組織無論是腎小球還是腎小管均未見充血水腫,腎周組織未見炎細(xì)胞浸潤。重癥胰腺炎組12h時(shí)腎小球、腎小管均累及,表現(xiàn)

7、為淤血、腫脹,以腎小管較為明顯,腎周組織可見少許炎細(xì)胞浸潤。重癥胰腺炎組24h時(shí)腎臟較前腫脹,無法辨認(rèn)部分腎小管結(jié)構(gòu),可見較多腎間質(zhì)炎細(xì)胞。重癥胰腺炎組48h時(shí)腎臟病變繼續(xù)加重,出現(xiàn)了壞死上皮細(xì)胞、大量炎細(xì)胞,以及管型。川芎嗪治療組各時(shí)段腎臟組織隨時(shí)間延長出現(xiàn)了腎小管上皮細(xì)胞壞死,腎周組織炎細(xì)胞浸潤,腎周脂肪皂化等表現(xiàn),但與同時(shí)段重癥胰腺炎組比較損傷程度均減輕。3.BUN、Cr、AMY、TNF-α的變化。重癥胰腺炎組BUN、Cr、AMY

8、、TNF-α隨時(shí)間延長逐漸升高,在各時(shí)間點(diǎn)均較正常組升高(P<0.05)。川芎嗪治療組BUN、Cr、AMY、TNF-α較重癥胰腺炎組降低(P<0.05)。4.MDA、SOD的變化。重癥胰腺炎組MDA隨時(shí)間延長逐漸升高,在各時(shí)間點(diǎn)均較正常組升高(P<0.05)。重癥胰腺炎組SOD隨時(shí)間延長逐漸降低,在各時(shí)間點(diǎn)均較正常組降低(P<0.05)。川芎嗪治療組MDA較重癥胰腺炎組降低(P<0.05)。川芎嗪治療組SOD較重癥胰腺炎組升高(P<0.

9、05)。5.腎臟組織病理學(xué)評分:重癥胰腺炎組腎臟組織病理學(xué)評分隨時(shí)間延長逐漸升高,在各時(shí)間點(diǎn)均較正常組升高(P<0.05)。川芎嗪治療組腎臟組織病理學(xué)評分較重癥胰腺炎組降低(P<0.05)。6.腎臟細(xì)胞Bcl-2／Bax的變化:重癥胰腺炎組Bcl-2／Bax比值隨時(shí)間延長逐漸降低,在各時(shí)間點(diǎn)均較正常組降低(P<0.05)。川芎嗪治療組Bcl-2／Bax比值隨時(shí)間延長逐漸升高,在各時(shí)間點(diǎn)均較重癥胰腺炎組升高(P<0.05)。結(jié)果顯示在各時(shí)