硫辛酸對大鼠脊髓繼發(fā)性損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制的探討.pdf

1、目的：近年來，隨著對脊髓繼發(fā)性損傷(SCI)機(jī)制研究的不斷深入，氧化應(yīng)激的作用逐漸引起了人們的重視。研究已經(jīng)證明，氧化應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙烯醛是脊髓繼發(fā)性損傷的潛在調(diào)節(jié)劑[1]，它可以促使體內(nèi)氧自由基的產(chǎn)生，加劇自由基引起脂質(zhì)過氧化，并通過正反饋使氧化應(yīng)激損傷持續(xù)存在[2]。因此，探尋減少或阻斷丙烯醛產(chǎn)生的有效方法成為治療SCI的有效方法。硫辛酸(alpha lipoic acid，LA)是一種強(qiáng)效抗氧化劑，研究發(fā)現(xiàn)它不僅能清

2、除機(jī)體后理和病理過程中產(chǎn)生的各種自由基，減輕機(jī)體氧化應(yīng)激[3，4]，還可有效清除丙烯醛等過氧化醛基[5]。國內(nèi)外關(guān)于LA在脊髓繼發(fā)損傷氧化應(yīng)激方面的作用尚未見報道。本實(shí)驗擬通過建立大鼠脊髓損傷模型，早期應(yīng)用LA，采用運(yùn)動評分法觀察對大鼠脊髓損傷后功能恢復(fù)的影響，并通過硫代巴比妥酸法檢測自(malondialdehydeMDA)濃度，黃嘌呤氧化酶法測定過氧化物酶(SOD)活性，免疫組化法結(jié)合計算機(jī)圖像分析技術(shù)半定量測定丙烯醛(acrole

3、in-ACR)的表達(dá)，進(jìn)一步探討LA對脊髓繼發(fā)性損傷的保護(hù)作用，為臨床治療脊髓損傷尋找有效的措施和途徑。
　　 方法：選取健康、成年Sprague-Dawley(SD)大鼠66只；體重240-280g，鼠齡3-4個月，雌雄不限。采用改良Allen’s-WD法制作脊髓損傷模型，將66只SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組6只，藥物干預(yù)組30只即脊髓損傷+硫辛酸尾靜脈注射組，損傷對照組30只即脊髓損傷+生理鹽水尾靜脈注射。脊髓損傷后24小時(

4、h)、3天(d)、7d分別取材，每組各8只，其中4只做HE染色及免疫組化測丙烯醛表達(dá)情況，余直接取材通過使用分光光度計測組織中SOD、MDA的含量。損傷對照組和藥物干預(yù)組各余6只大鼠分別于SCI后3、7、14、21d進(jìn)行BBB運(yùn)動評分觀察行為學(xué)變化。采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理，三組問的脊髓組織SOD、MDA測定值、ACR平均光密度值及BBB運(yùn)動評分值多組均數(shù)間比較采用單因素方差分析，均數(shù)間兩兩比較采用LSD檢驗。
　　 結(jié)

5、果：1、光鏡下見正常組神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)好，數(shù)量多，胞膜完整，未被破壞脊髓損傷后24h見局灶性出血、神經(jīng)元細(xì)胞腫脹、變圓、數(shù)目減少，核周縮、碎裂，尼氏小體淡染或消失。硫辛酸治療后24h可見神經(jīng)元細(xì)胞腫脹減輕，數(shù)目較損傷組增多。脊髓損傷后7d損傷組神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)目明顯減少，并有空泡形成。治療組神經(jīng)元形態(tài)接近正常，腫脹、壞死、空泡等改變比對照組明顯減輕。24h及7d治療組脊髓切片病理改變均較對照組輕。
　　 2、Basso-Beattie

6、-Bresnahan(BBB)行為學(xué)評分結(jié)果：三組在術(shù)前BBB評分均無明顯差別P>0.05，術(shù)后3d、7d、14d、21d各時間點(diǎn)損傷組與硫辛酸治療組比較均有高度顯著差別(p<0.01)，治療組各時間點(diǎn)評分值顯著高于損傷組；術(shù)后3d、7d、14d、21d各個時間點(diǎn)治療組與正常組比較差異均不顯著(p>0.05)治療組各時間點(diǎn)評分值與正常組相近，但未達(dá)到正常值。
　　 3、SOD測定結(jié)果，硫辛酸治療組24h、3d、7d的SOD活性值

7、分別為173.7±6.9、221.1±16.7、225.3±13.8，隨時間變化而明顯遞增。損傷組24h、3d、7d的SOD活性值分別為124.7±8.8、137.67±4.8、145.9±5.7隨時間變化遞增不明顯，三個時間點(diǎn)兩組SOD活性值比較均有高度顯著差異(p<0.01)。第3d、7d治療組與正常組(234.6±11.9)比較無顯著差異(p>0.05)，治療組SOD活性值接近正常。
　　 4、MDA測定結(jié)果，硫辛酸治療組

8、24h、3d、7d的MDA含量分別為7.43±1.1、6.20±0.71、5.85±0.70，隨時間變化而遞減。損傷組24h、3d、7d的MDA含量分別為12.3±1.2、11.9±1.14、11.011±1.09隨時間變化遞減不明顯，三個時間點(diǎn)兩組MDA含量比較均有高度顯著差異(p<0.01)，治療組在三個時間點(diǎn)的MDA含量均明顯低于損傷組。第3d、7d治療組與正常組(5.5±0.54)比較無顯著差異(p>0.05)，治療組MDA含量

9、接近正常。
　　 5、脊髓組織丙烯醛免疫組化染色，硫辛酸治療組24h、3d、7d的平均光密度值分別為0.2252±0.0402、0.1965±0.0435、0.1847±0.0401，隨時間推移遞減。損傷組的平均光密度值分別為0.3636±0.0100、0.3462±0.0157、0.3052±0.0162也隨時間有下降趨勢，治療組在三個時間點(diǎn)的平均光密度值均明顯低于損傷組，三個時間點(diǎn)兩組平均光密度值比較均有高度顯著差異(p<0

10、.01)。第3d、7d治療組與正常組(5.5±0.54)比較無顯著差異(p>0.05)，治療組平均光密度值接近正常。
　　 結(jié)論：本實(shí)驗進(jìn)一步證實(shí)了脊髓繼發(fā)損傷后脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙烯醛隨時間的表達(dá)變化，同時驗證了丙烯醛及自由基共同參與了脊髓繼發(fā)性損傷神經(jīng)元細(xì)胞的損害過程。強(qiáng)效抗氧化劑硫辛酸能抑制脊髓繼發(fā)損傷過程中丙烯醛的表達(dá)，并能清除自由基，保護(hù)并促進(jìn)內(nèi)源性抗氧化酶類再生，對脊髓損傷繼發(fā)傷神經(jīng)元細(xì)胞有很好的保護(hù)作用，對機(jī)體運(yùn)動功能