α-硫辛酸保護(hù)胰島β細(xì)胞脂毒性損傷的機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過3T3L1脂肪細(xì)胞與大鼠原代胰島細(xì)胞共培養(yǎng)，并加入抗氧化劑α-硫辛酸進(jìn)行干預(yù)。從而在整體水平闡明脂肪細(xì)胞對胰島β細(xì)胞的脂毒性損傷，也為α-硫辛酸在糖尿病領(lǐng)域的運(yùn)用開拓新的思路。 方法：對胰島細(xì)胞觀察以下指標(biāo)：(1)胰島素釋放試驗及細(xì)胞內(nèi)胰島素含量。(2)葡萄糖刺激的胰島素分泌(GSIS)的相關(guān)基因：用Realtime PCR檢測GLUT2、GCK及Kir6.2基因mRNA表達(dá)水平。(3)自身胰島素信號通路：用IP和We

2、stern Blot檢測IR-β、IRS-1及其酪氨酸磷酸化水平。(4)氧化應(yīng)激指標(biāo)：測定超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)的活性和丙二醛(MDA)含量。并用Realtime PCR檢測SOD及CAT mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果：①低糖時對照組胰島素分泌為0.38±0.09 ng·mL-1·islet-1·h-1，共培養(yǎng)組胰島素分泌增多為0.79±0.35 ng·mL-1·islet-1·h-1(P=0.028)，LA

3、組胰島素分泌為0.14±0.12 ng·mL-1·islet-1·h-1，與對照組無差別(P=0.156)。高糖時三組胰島素分泌無差別(P=0.202)。刺激指數(shù)(高糖胰島素分泌/低糖胰島素分泌，stimulation index，SI)對照組為2.84±0.92，共培養(yǎng)組下降為1.57±0.61(P=0.04 vs對照組)，LA組升高至9.14±4.72(P=0.004 vs對照組)。②Realtime PCR顯示：與對照組(mRNA

4、為1)相比，共培養(yǎng)組胰島細(xì)胞GLUT2、GCK及Kir6.2基因mRNA下調(diào)為0.27±0.11(P=0.0001)、0.32±0.24(P=0.009)、0.41±0.09(P=0.003)。加入α-硫辛酸后，三個基因變化不大(P>0.05 vs共培養(yǎng)組)。③與對照組相比，共培養(yǎng)組胰島細(xì)胞IR-β、IRS-1蛋白及酪氨酸磷酸化表達(dá)下降。加入α-硫辛酸后，IR-β較對照組上調(diào)，IRS-1與對照組接近，IR-β、IRS-1酪氨酸磷酸化表達(dá)

5、均上調(diào)。④與對照組13.03±5.98 nmol/mg protein相比，共培養(yǎng)組胰島細(xì)胞MDA水平升高為21.08±12.36 nmol/mg protein(P=0.042)。加入α-硫辛酸后，MDA水平恢復(fù)為15.28±8.48 nmol/mgprotein(P=0.56)。SOD活力三組間差別不明顯(P=0.593)。CAT活力對照組和共培養(yǎng)組差別不大(P=0.278)，LA組CAT活力明顯上升至43.95±26.36 U/m

6、g protein(P=0.007 vs對照組，P=0.001 vs共培養(yǎng)組)。Realtime PCR顯示：與對照組(mRNA為1)相比，共培養(yǎng)組SOD和CAT mRNA表達(dá)分別下調(diào)為0.55±0.25(P=0.01)、0.46=0.17(P=0.001)。加入α-硫辛酸后，SOD mRNA恢復(fù)至0.95±0.81(P=0.999 vs對照組)，CAT mRNA為0.62±0.38(P=0.166 vs對照組)。 結(jié)論：⑴通過