α-硫辛酸對肉雞抗氧化的影響及其作用機(jī)制研究.pdf

1、氧化還原平衡在家禽的正常生長中起到了重要的作用，然而外界眾多的環(huán)境因子會誘導(dǎo)家禽體內(nèi)活性氧的產(chǎn)生，損傷家禽的抗氧化系統(tǒng)，誘導(dǎo)氧化應(yīng)激的發(fā)生。家禽氧化應(yīng)激的發(fā)生會導(dǎo)致對營養(yǎng)物質(zhì)代謝障礙，引起生長緩慢，嚴(yán)重時會引起各種疾病，造成死亡。通過日糧中添加抗氧化劑，減少外界因子誘導(dǎo)的氧化性能，增強(qiáng)和保護(hù)家禽的抗氧化系統(tǒng)受到了較多的關(guān)注。
　　α-硫辛酸是在生物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的一種八碳羧酸，主要功能是作為線粒體中氧化磷酸化過程中的多酶復(fù)合物的輔因子，

2、維持線粒體功能。日糧中添加α-硫辛酸能夠提高機(jī)體的抗氧化性能，對由于衰老造成的線粒體功能障礙和由于脂多糖注射或紫外輻射誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激具有保護(hù)性作用。敵草快和魚藤酮注射會誘導(dǎo)機(jī)體氧化應(yīng)激的發(fā)生。因此本研究分別使用腹腔注射敵草快和魚藤酮來構(gòu)建急性氧化應(yīng)激模型與慢性氧化應(yīng)激模型，來研究日糧中添加α-硫辛酸對敵草快和魚藤酮注射造成的肉雞氧化損傷是否具有保護(hù)性效果，并初步探討其作用機(jī)理。
　　1.研究日糧中添加不同水平的α-硫辛酸對內(nèi)雞生長

3、性能、胴體性狀，肉品質(zhì)和抗氧化功能的影響。
　　2.探討不同階段的α-硫辛酸添加對肉雞生長性能，抗氧化性能和肉品質(zhì)的影響。
　　3.利用敵草快腹腔注射建立肉雞急性氧化應(yīng)激模型，研究日糧中添加α-硫辛酸和急性氧化應(yīng)激對機(jī)體氧化還原反應(yīng)的影響。
　　結(jié)果表明:
　　(1)敵草快注射顯著降低了肉雞的體重和免疫器官指數(shù)(P＜0.05)。日糧中添加α-硫辛酸緩解了敵草快注射誘導(dǎo)的法氏囊指數(shù)降低。敵草快注射損害空腸氧化還原狀

4、態(tài)，降低GSH含量(P＜0.05)，T-SOD和GSH-Px活性(P＜0.05)，增加MDA水平和XO活性(P＜0.05)。添加α-硫辛酸改善敵草快誘導(dǎo)的氧化還原狀態(tài)，升高GSH含量(P＜0.05)，T-SOD和GSH-Px活性(P＜0.05)，降低MDA水平和XO活性(P＜0.05)，增加腸道黏膜二胺氧化酶(DAO)活性(P＜0.05)。敵草快注射顯著增加空腸黏膜中的促炎癥細(xì)胞因子（IL-1β和TNF-α)(P＜0.05），增加IgG

5、和SIgA(P＜0.05)。α-硫辛酸的添加降低空腸黏膜中促炎癥因子（IL-1β和TNF-α）水平(P＜0.05)，增加空腸黏膜中IgG和SIgA水平(P＜0.05)。敵草快注射對腸道造成明顯的損傷，表現(xiàn)在絨毛高度的降低與隱窩深度的增加，顯著降低了腸道黏膜中DAO的活性(P＜0.05)，增加可溶性的細(xì)胞間粘附分子（sICAM-1）水平(P＜0.05)，降低緊密連接蛋白(TJP-1)表達(dá)(P＜0.05)，α-硫辛酸的添加表現(xiàn)出對敵草快誘導(dǎo)

6、的腸道氧化損傷的保護(hù)性效果，反映在絨毛高度的增加和隱窩深度的降低，DAO活性的增加，sICAM-1水平降低和TJP-1表達(dá)增加。敵草快注射顯著增加核因子-κB（NF-κB）和環(huán)氧合酶-2(COX-2)表達(dá)，增加髓樣分化因子88(MyD88)的表達(dá)，以及NF-κB-p65自細(xì)胞質(zhì)向細(xì)胞核的轉(zhuǎn)位作用(P＜0.05)。α-硫辛酸的添加不僅降低了NF-κB，COX-2和MyD88的表達(dá)，同時也減弱了NF-κB-p65自細(xì)胞質(zhì)向細(xì)胞核的轉(zhuǎn)位作用(

7、P＜0.05)。
　　(2)敵草快注射引起了肝臟氧化還原的失衡:敵草快降低肝臟的抗氧化性能，表現(xiàn)在GSH水平顯著下降，GSH-Px活性顯著下降，MDA和蛋白羰基水平顯著升高(P＜0.05)，同時敵草快注射顯著升高肝臟中一些氧化酶活性(P＜0.05)。α-硫辛酸的添加能夠改善敵草快注射誘導(dǎo)的肝臟氧化還原失衡，表現(xiàn)為增加肝臟中GSH水平，升高肝臟中T-SOD，GSH-Px活性，降低肝臟中MDA，蛋白羰基水平(P＜0.05)。同時對肝臟

8、中氧化酶活性的升高也表現(xiàn)出抑制性效果。敵草快注射引起肝臟線粒體的功能障礙，表現(xiàn)在線粒體結(jié)構(gòu)的受損（線粒體腫脹，內(nèi)嵴消失），同時也顯著降低線粒體膜電位，導(dǎo)致Caspase-3活性增加，20S蛋白酶體活性降低和細(xì)胞凋亡指數(shù)升高(P＜0.05)，添加α-硫辛酸緩解了敵草快注射誘導(dǎo)的線粒體功能障礙，表現(xiàn)在維持線粒體形態(tài)完整性，升高線粒體膜電位和降低Caspase-3活性，升高20S蛋白酶體活性，減少細(xì)胞凋亡指數(shù)(P＜0.05)。敵草快注射顯著增

9、加肝臟Nrf2基因，NQO1基因，UCP基因和BAX基因表達(dá)(P＜0.05)，添加α-硫辛酸增加Nrf2基因，NQO1基因，UCP基因表達(dá)，同時顯著降低BAX基因表達(dá)(P＜0.05)。敵草快注射誘導(dǎo)肉雞肝臟Nrf2蛋白發(fā)生轉(zhuǎn)位作用，α-硫辛酸的添加進(jìn)一步增加了Nrf2蛋白轉(zhuǎn)位作用。
　　4.利用魚藤酮腹腔連續(xù)注射建立肉雞慢性氧化應(yīng)激模型，研究日糧中添加α-硫辛酸和慢性氧化應(yīng)激對機(jī)體氧化還原反應(yīng)的影響。 結(jié)果表明:
　　

10、(1)魚藤酮注射顯著降低了肉雞體重，添加α-硫辛酸可顯著緩解肉雞體重的降低(P＜0.05)。魚藤酮注射顯著降低肉雞胸腺和法氏囊的免疫器官指數(shù)(P＜0.05)，添加α-硫辛酸對魚藤酮注射誘導(dǎo)的免疫器官指數(shù)降低表現(xiàn)出保護(hù)性效果，表現(xiàn)在升高胸腺指數(shù)上(P＜0.05)。魚藤酮注射顯著降低空腸黏膜抗氧化性能，表現(xiàn)在降低GSH含量，T-SOD，GSH-Px活性(P＜0.05)，同時升高空腸黏膜MDA水平(P＜0.05)，添加α-硫辛酸對魚藤酮注射誘

11、導(dǎo)的空腸黏膜抗氧化性能的下降表現(xiàn)出緩解效果，升高空腸黏膜中GSH含量，提高T-SOD和GSH-Px活性，降低MDA水平(P＜0.05)。魚藤酮注射升高空腸黏膜促炎癥細(xì)胞因子IL-1β和TNF-α水平(P＜0.05)，升高IgG和SIgA水平(P＜0.05)。添加α-硫辛酸減弱魚藤酮注射誘導(dǎo)的空腸黏膜IL-1β和TNF-α水平增加，增加魚藤酮注射誘導(dǎo)空腸黏膜IgG和SIgA水平增加(P＜0.05)。魚藤酮注射增加空腸黏膜NF-κB和COX

12、-2基因表達(dá)(P＜0.05)，降低TJP-1基因表達(dá)(P＜0.05)，添加α-硫辛酸降低魚藤酮注射誘導(dǎo)的空腸黏膜NF-κB和COX-2基因表達(dá)增加(P＜0.05)。魚藤酮注射降低空腸黏膜DAO活性(P＜0.05)，增加空腸黏膜sICAM-1水平(P＜0.05)，添加α-硫辛酸增加魚藤酮注射誘導(dǎo)的空腸黏膜DAO活性降低，降低魚藤酮注射因為的空腸黏膜sICAM-1水平增加(P＜0.05)。魚藤酮注射增加空腸黏膜NF-κB-p65核轉(zhuǎn)位作用(

13、P＜0.05)，日糧中添加α-硫辛酸抑制魚藤酮注射誘導(dǎo)的空腸黏膜NF-κB-p65核轉(zhuǎn)位作用。
　　(2)魚藤酮的注射顯著降低了肝臟的抗氧化性能，表現(xiàn)在肝臟GSH水平、T-SOD和GSH-Px活性(P＜0.05)，MDA和蛋白羰基水平顯著升高(p＜0.05)，同時魚藤酮注射顯著升高肝臟氧化性能。添加α-硫辛酸改善魚藤酮注射誘導(dǎo)的肝臟氧化還原失衡，表現(xiàn)在升高肝臟中GSH含量，提高T-SOD的活性，降低MDA和蛋白羰基水平(P＜0.0

14、5)，同時也顯著降低魚藤酮注射誘導(dǎo)的肝臟NOX，XO，MAO和MPO活性升高(P＜0.05)。魚藤酮注射造成肝臟線粒體功能障礙，表現(xiàn)在線粒體形態(tài)結(jié)構(gòu)受損和線粒體膜電位顯著降低(P＜0.05)。同時魚藤酮顯著降低20S蛋白酶體和線粒體復(fù)合物Ⅰ活性(P＜0.05)，顯著升高Caspase-3活性，肝臟BAX基因表達(dá)(P＜0.05)，顯著增加肝臟細(xì)胞凋亡指數(shù)(P＜0.05)。添加α-硫辛酸維持了線粒體正常功能，表現(xiàn)在改善受損線粒體形態(tài)和顯著升

15、高線粒體膜電位(P＜0.05)，同時升高20S蛋白酶體活性和線粒體復(fù)合物Ⅰ活性，降低Caspase-3活性和肝臟BAX基因表達(dá)(P＜0.05)，降低肝臟細(xì)胞凋亡指數(shù)(P＜0.05)。魚藤酮注射增加Nrf2和NQO1基因表達(dá)(P＜0.05)，降低UCP基因的表達(dá)(P＜0.05)，添加α-硫辛酸顯著增加UCP基因的表達(dá)(P＜0.05)。魚藤酮注射顯著增加Nrf2蛋白自細(xì)胞質(zhì)向細(xì)胞核的轉(zhuǎn)位作用，日糧中添加α-硫辛酸進(jìn)一步增加Nrf2蛋白轉(zhuǎn)位效