熱氧化大豆蛋白對肉雞的影響及維生素E和硫辛酸的調控研究.pdf

1、飼料中的蛋白質在加工或長期儲存過程中易與氧氣、酶類、金屬離子等多種促氧化劑接觸，且由于其具有較高的含量和反應活性而易被氧化修飾。然而，目前有關飼料源氧化蛋白對養(yǎng)殖動物健康影響的研究尚未見報道。本文研究熱處理和室溫儲存兩種方式對豆粕蛋白質氧化的影響，并以大豆分離蛋白為原料，探討不同熱處理時間氧化大豆蛋白對AA肉雞生產性能、氧化還原狀態(tài)、免疫功能及細胞凋亡的影響;進一步研究維生素E(VE)和硫辛酸(LA)對攝食氧化蛋白肉雞的調控作用及其機制

2、。本文分為以下六個部分:
　　試驗一旨在研究豆粕中的蛋白質在室溫儲存條件下的氧化變質規(guī)律，同時探討干熱處理對豆粕和大豆分離蛋白(SPI)中蛋白質氧化的影響。取新鮮豆粕200 g裝入自封袋，置于室溫下保存不同時間（1、10、20、30和60 d）;另取豆粕和SPI各20 g于烘箱中100℃加熱不同時間（0、1、2、4和8h），分析兩種處理方式對豆粕和SPI中氨基酸、蛋白質羰基及巰基含量的影響。結果表明，隨加熱時間延長，豆粕和SPI中

3、蘇氨酸、酪氨酸、賴氨酸及組氨酸含量在數值上逐漸降低;與新鮮豆粕（對照）相比，室溫儲存和干熱處理不同時間后蛋白質羰基含量均顯著增加（P＜0.05）;隨儲存和干熱處理時間增加，豆粕蛋白質巰基和總巰基基團含量均逐漸降低;與正常SPI相比，加熱1h以上使SPI中蛋白質羰基和巰基含量明顯降低(P＜0.05)，熱處理4h以上亦使SPI中游離氨基含量顯著降低（P＜0.05）。
　　試驗二旨在研究不同熱處理時間SPI對肉雞生產性能、抗氧化功能、腸

4、道形態(tài)及細胞凋亡的影響。選取320只1日齡AA肉雞隨機分為4組，每組8個重復，每個重復10只。第1組試驗肉雞飼喂正常未加熱處理SPI的基礎日糧（對照組），其余各組分別用加熱1、4及8h的SPI等量替代基礎日糧中的SPI，試驗為期21d。結果表明，熱處理SPI8 h組21d肉雞體重較對照組顯著降低（P＜0.05）;與對照組相比，熱處理SPI8 h使21d肉雞血清ACTH和Cor水平、黏膜H2O2及血清、黏膜MDA含量增加(P＜0.05)，

5、熱處理SPI4 h以上使21d肉雞血清和黏膜GSH含量明顯降低(P＜0.05);與對照組相比，熱處理SPI8 h組21d肉雞十二指腸隱窩深度增加、腸道V/C值和21d空腸黏膜NOS活性明顯降低（P＜0.05）;熱處理SPI8 h組14和21d肉雞黏膜caspase-3活性和腸道細胞凋亡指數較對照組顯著增加（P＜0.05）。
　　試驗三旨在研究不同熱處理時間SPI對內雞免疫器官相對重量、免疫球蛋白、細胞因子及相關基因表達的影響。試驗

6、設計同試驗二。結果表明，與對照組相比，熱處理SPI1和8h使14d肉雞肝臟相對重量明顯降低（P＜0.05），熱處理SPI4 h以上顯著降低21 d肉雞脾臟和法氏囊相對重量（P＜0.05）;熱處理SPI8 h組14d肉雞血清和十二指腸黏膜IgG含量較對照組明顯降低(P＜0.05);與對照組相比，熱處理SPI8h使21 d肉雞黏膜TNF-α含量(P=0.063)、脾臟和黏膜ICAM-1含量及黏膜IFN-γmRNA表達量（P＜0.05）增加;

7、熱處理SPI8 h組14d肉雞血清、21 d黏膜MPO活性較對照組顯著提高（P＜0.05），黏膜MPO mRNA表達量亦明顯增加(P＜0.05)。
　　試驗四旨在研究VE和LA對攝食氧化蛋白肉雞生產性能、血清激素及腸道形態(tài)的影響。選取300只1日齡AA內雞隨機分為5組，每組6個重復，每個重復10只。第1組為對照組，飼喂正常SPI的基礎日糧，第2組用熱處理8h的SPI等量替代基礎日糧中的SPI，第3～5組分別在第2組日糧中額外添加2

8、00 mg/kg VE、200 mg/kg LA及200 mg/kg VE+200 mg/kg LA，試驗為期21d。結果表明，與對照組相比，熱處理氧化蛋白(HSPI組)可對內雞生產性能造成一定負面影響（P＞0.05），并提高肉雞血清Cor、T3和T4含量及14d空腸隱窩深度(P＜0.05)，降低14d十二指腸絨毛高度和空腸V/C值（P＜0.05）。與HSPI組相比，日糧添加200 mg/kg VE可提高肉雞平均體重、日增重及采食量，同

9、時提高21 d肉雞血清T4含量和14 d空腸V/C值（P＜0.05），降低14d空腸隱窩深度(P＜0.05);日糧添加200 mg/kg LA明顯降低14d空腸隱窩深度(P＜0.05);日糧聯(lián)合添加200 mg/kg VE和LA可提高肉雞平均日增重、14d血清Cor含量及腸道V/C值，降低14d空腸隱窩深度（P＜0.05）。
　　試驗五旨在研究VE和LA對攝食氧化蛋白肉雞抗氧化功能、Nrf2通路及腸道細胞凋亡的影響。試驗設計同試驗

10、四。結果表明，與對照組相比，氧化蛋白組(HSPI)肉雞血清和組織清除自由基能力降低（P＜0.05），CAT、SOD、GSH-Px活性及GSH含量降低（P＜0.05），肝臟H2O2、血清和肝臟MDA含量明顯增加（P＜0.05）;肝臟內Nrf2信號通路和NF-κB被激活(P＜0.05)，黏膜caspase-3含量和腸道細胞凋亡指數增加。與HSPI組相比，日糧添加200 mg/kg VE可提高肉雞肝臟清除羥自由基能力、肝臟CAT活性及黏膜GS

11、H含量(P＜0.05)，降低血清、組織MDA含量(P＜0.05)，明顯抑制肝臟Nrf2信號通路和NF-κB的激活（P＜0.05），黏膜caspase-3含量和腸道細胞凋亡指數降低(P＜0.05);日糧添加200 mg/kg LA可提高肉雞肝臟清除羥自由基能力，降低血清MDA含量和HO-1的蛋白表達量（P＜0.05）;日糧聯(lián)合添加200 mg/kg VE和LA可提高肉雞清除自由基能力、SOD和GST活性及GSH含量，血清和組織MDA含量顯

12、著降低（P＜0.05），明顯抑制肝臟Nrf2信號通路和NF-κB的激活(P＜0.05)，21d肉雞十二指腸黏膜caspase-3含量和細胞凋亡指數降低(P＜0.05)。
　　試驗六旨在研究氧化蛋白對肉雞免疫功能的影響及維生素E和硫辛酸的調控作用。試驗設計同試驗四。結果表明，與對照組相比，HSPI組21 d肉雞腸道黏膜TNF-α和ICAM-1含量及黏膜MPO表達量增加(P＜0.05)，21 d肉雞空腸黏膜NOS活性降低(P＜0.05

13、)。與HSPI組相比，日糧添加200 mg/kg VE提高了14d空腸黏膜IgG含量(P＜0.05)，明顯降低黏膜TNF-α和ICAM-1含量及21d血清MPO活性(P＜0.05);日糧添加200 mg/kg LA可提高14 d十二指腸黏膜IgG和SIgA含量及NOS活性（P＜0.05），降低黏膜ICAM-1含量和IFN-γ表達（P＜0.05）;日糧聯(lián)合添加200 mg/kgVE和LA顯著提高14 d血清IgG含量和十二指腸黏膜NOS活

14、性(P＜0.05)，降低黏膜ICAM-1含量、IFN-γ表達及21 d血清MPO活性(P＜0.05)。
　　綜上所述，得出以下結論:
　　(1)隨室溫儲存和干熱處理時間延長，豆粕中蛋白質氧化程度增加;干熱處理可加速大豆分離蛋白中蛋白質的氧化。
　　(2)熱氧化大豆蛋白對肉雞生產性能造成明顯負面影響，并引起肉雞體內代謝速度加快，日糧添加200 mg/kg VE可明顯提高肉雞的生產性能。
　　(3)氧化蛋白可通過降低

15、肉雞腸道絨毛高度、增加隱窩深度而對腸道形態(tài)結構造成不利影響;日糧添加VE或LA對腸道形態(tài)結構具有顯著的改善作用，聯(lián)合添加VE和LA較二者單獨使用時有更好的效果。
　　(4)肉雞攝食氧化蛋白后體內抗氧化酶活性和自由基清除能力降低，導致ROS在體內積累，進而激活Nrf2信號通路和NF-κB;而日糧添加VE和LA可提高肉雞的抗氧化功能，從而減弱ROS對Nrf2通路和NF-κB的刺激作用。
　　(5)熱氧化大豆蛋白可對肉雞免疫功能造