α-硫辛酸對骨骼肌蛋白質沉積的影響及信號通路.pdf

1、骨骼肌蛋白質周轉受到內分泌激素、營養(yǎng)物和炎癥等因素的調節(jié)。α-硫辛酸（ALA）在能量動態(tài)平衡中起重要作用。因此，本研究的目的是探究ALA對骨骼肌蛋白質合成的影響，并揭示其潛在的作用機制。
　　為了研究ALA對骨骼肌蛋白質沉積的影響，本試驗在細胞水平上，選用C2C12細胞，采用總蛋白/DNA、嘌呤霉素方法、Western Blot、qPCR和免疫細胞化學方法檢測C2C12細胞蛋白質沉積及相關通路蛋白的表達水平。在活體水平上，選用體重

2、20 g左右3周齡的雄性昆明小鼠，腹腔注射50 mg/kg的ALA3 h后，通過Western Blot和PCR方法檢測腓腸肌蛋白質沉積相關通路蛋白的表達水平。研究結果表明：（1）在C2C12細胞中，添加25μM的ALA可以顯著增加細胞總蛋白/DNA的比值和嘌呤霉素參與的蛋白質合成速度，同時顯著提高MHCⅡ、p-Akt、p-mTOR和p-S6的蛋白表達，降低AMPK、Ikkα/β和p-eIF2α的蛋白表達，但對p-4E-BP1的蛋白表達

3、無顯著影響。（2）小鼠腹腔注射50 mg/kg ALA3 h后，可以顯著提高小鼠腓腸肌中MHCⅡ、p-Akt、p-mTOR、p-S6和p-FoxO1的蛋白表達，顯著下調腓腸肌中 p-eIF2α和 p-AMPK的蛋白表達，但對p-4E-BP1的蛋白表達無顯著變化。
　　為了研究ALA對骨骼肌蛋白質沉積的調控機制，本試驗在C2C12細胞水平上進行了驗證。采用總蛋白/DNA、嘌呤霉素、Western Blot、PCR和免疫共沉淀方法研究

4、其對蛋白質合成及炎癥相關信號通路蛋白表達的影響。研究結果表明：（1）25μM ALA分別與500 nM mTOR阻斷劑（雷帕霉素）和5μM PI3K阻斷劑（LY294002）共處理C2C12細胞后，可以完全顯著降低細胞總蛋白/DNA的比值和嘌呤霉素參與的蛋白質合成速度及下游相關蛋白的表達；但25μMALA與0.5 mM AMPK激動劑（AICAR）共處理C2C12細胞后，對細胞總蛋白/DNA的比值和嘌呤霉素參與的蛋白質合成速度及下游相關

5、蛋白的表達無顯著影響。（2）25μMALA處理C2C12細胞后，可以顯著增加TLR2和MyD88的mRNA表達；干擾TLR2后，可以顯著抑制細胞總蛋白/DNA的比值和嘌呤霉素參與的蛋白質合成速度，提高下游相關蛋白的表達；IP結果顯示，ALA可以顯著增強MyD88與PI3K亞基p85的結合。
　　綜上，ALA促進 C2C12細胞蛋白質合成，其可能的調控機制是 ALA通過激活TLR2，促進MyD88與PI3K的結合，進而增強Akt/m