日糧亮氨酸水平對(duì)早期斷奶仔豬骨骼肌蛋白質(zhì)組影響的研究.pdf

1、仔豬早期斷奶措施會(huì)導(dǎo)致仔豬出現(xiàn)早期斷奶應(yīng)激反應(yīng)，誘導(dǎo)仔豬骨骼肌、肝臟和脾臟發(fā)生自噬。自噬是一種在進(jìn)化上高度保守的分解代謝過(guò)程，參與到細(xì)胞的多個(gè)生理和病理過(guò)程，如生長(zhǎng)發(fā)育、分化、代謝、免疫、炎癥和凋亡。亮氨酸不僅是蛋白質(zhì)合成的底物，還可以通過(guò)mTORC1、Sestrin2和谷氨酸脫氫酶等信號(hào)通路發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬的功能。因此，亮氨酸對(duì)細(xì)胞自噬的調(diào)控機(jī)制有待迸一步研究，以期為斷奶仔豬的精準(zhǔn)飼養(yǎng)提供新的研究資料。
　　本研究通過(guò)對(duì)早期斷奶

2、仔豬分別飼喂1.66％和2.10％亮氨酸水平的日糧，在21日齡、22日齡和26日齡各選取3頭仔豬進(jìn)行屠宰，取其背最長(zhǎng)肌樣品，運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)iTRAQ技術(shù)鑒定仔豬骨骼肌中的差異表達(dá)蛋白，并篩選受亮氨酸調(diào)節(jié)的關(guān)鍵自噬相關(guān)蛋白。在仔豬骨骼肌中共鑒定到蛋白質(zhì)1919個(gè)，差異表達(dá)蛋白402個(gè)，且特有肽段數(shù)、肽段序列長(zhǎng)度和肽段序列覆蓋率都符合質(zhì)譜測(cè)序標(biāo)準(zhǔn)。差異表達(dá)蛋白的GO分析結(jié)果顯示，差異表達(dá)蛋白主要分布在細(xì)胞內(nèi)組分和細(xì)胞器部分，參與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代

3、謝過(guò)程，主要發(fā)揮結(jié)合與催化功能。差異表達(dá)蛋白代謝通路分析顯示，蛋白質(zhì)合成相關(guān)的信號(hào)通路顯著增強(qiáng)，包括eIF2、eIF3E、eIF5、eEF1信號(hào)通路和40S核糖體相關(guān)蛋白等。通過(guò)Western blot驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是mTOR的活性，還是其下游底物S6K1的活性都顯著增強(qiáng)。同時(shí)，與能量合成相關(guān)的氧化磷酸化通路中的F0F1-ATP合成酶、NADH脫氫酶、鐵硫蛋白，三羧酸循環(huán)通路中的順烏頭酸酶、異檸檬酸脫氫酶、琥珀酸脫氫酶、酮戊二酸脫氫酶、

4、琥珀酰輔酶A，糖酵解通路中的丙酮酸激酶，磷酸戊糖途徑中的磷酸葡萄糖異構(gòu)酶的含量都顯著升高。通過(guò)高效液相色譜法也發(fā)現(xiàn)在試驗(yàn)組中，AMP含量極顯著降低，ADP含量顯著降低，ATP含量顯著升高，AMP/ATP比值極顯著降低。最后，我們篩選到CAPNS1、RACK1和PRKAR1A三個(gè)自噬相關(guān)蛋白，且在斷奶應(yīng)激誘導(dǎo)自噬反應(yīng)的過(guò)程中CAPNS1、RACK1和PRKAR1A的表達(dá)量都顯著升高。另外，在26日齡試驗(yàn)組中，p-AMPK的含量顯著下降，p

5、-mTOR的含量顯著升高。因此，亮氨酸可以激活仔豬骨骼肌中的多條能量合成途徑，很可能通過(guò)抑制AMPK的活性，增強(qiáng)mTOR的活性，并抑制RACK1的表達(dá)，最終起到抑制自噬的作用。
　　綜上所述，得出以下結(jié)論:(1)2.10％的亮氨酸水平日糧促進(jìn)斷奶仔豬骨骼肌中蛋白質(zhì)合成相關(guān)的信號(hào)通路，包括mTOR信號(hào)通路和eIF2信號(hào)通路等;(2)2.10％的亮氨酸水平日糧促進(jìn)斷奶仔豬骨骼肌中的能量合成，極顯著降低AMP含量，顯著提高ATP含量;(