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文檔簡介
1、以蛋白降解增加為特征的骨骼肌蛋白高分解反應為膿毒癥最明顯的代謝改變。為了明確膿毒癥骨骼肌萎縮過程中肌肉蛋白的變化,本研究采用蛋白質組學的方法比較手術對照組與盲腸結扎穿孔(cecal ligation puncture,CLP)組大鼠術后1、3、5、7d伸趾長肌與比目魚肌蛋白圖譜的變化。通過稱量肌肉重量,發(fā)現(xiàn)伸趾長肌于CLP術后1d明顯輕于手術對照組(P<0.05),而比目魚肌重量于第3d才明顯降低(P<0.05)。采用雙向電泳方法于伸趾
2、長肌中檢測到16個差異蛋白,經質譜方法鑒定出12個蛋白;同時于比目魚肌中檢測到17個差異蛋白,鑒定出13個。這些差異蛋白按功能分為收縮蛋白,細胞骨架蛋白,代謝相關酶,氧化磷酸化蛋白,氧化還原蛋白,應激反應蛋白以及熱休克蛋白。采用Western blot方法驗證了膿毒癥后VDAC2(voltage-dependent anion channel2,VDAC2),αB-crystailin(Cry AB)及cofilin2的表達規(guī)律。結果顯
3、示,CLP術后兩種肌肉VDAC2表達降低,cofilin2表達升高,另外觀察到Cry AB在兩種肌肉中呈現(xiàn)相反的變化,于伸趾長肌中術后第1d起表達開始升高,而于比目魚肌中術后第1d反而降低。我們進一步建立了地塞米松(dexamethasone,Dexa)促進L6肌管蛋白降解,熱休克或胰島素樣生長因子(insulin-like growth factorⅠ,IGF-Ⅰ)抑制L6肌管蛋白降解的細胞培養(yǎng)模型,用以觀察候選蛋白的變化規(guī)律。發(fā)現(xiàn)D
4、exa能夠降低肌管中VDAC2的表達,但對Cry AB及cofilin2的表達起到增強的作用。熱休克及IGF-Ⅰ均能促進三種候選蛋白的表達,并能有效干預Dexa對VDAC2表達的抑制作用。 因此,本研究從動物實驗及細胞培養(yǎng)實驗的結果中得到如下結論:1、在膿毒癥的打擊下,骨骼肌中氧化還原平衡紊亂為凋亡的誘發(fā)因素;2、膿毒癥骨骼肌蛋白降解可能與VDAC2參與的線粒體凋亡途徑活化有關;3、CryAB及cofilin2在膿毒癥或Dexa
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