硫辛酸在氯化鎘致HepG2細(xì)胞損傷中的抗氧化作用研究.pdf

1、鎘廣泛存在于生產(chǎn)和生活環(huán)境中，是一種常見的環(huán)境重金屬污染物，同時也是一種多器官的累積毒物，其中肝臟是主要的靶器官。在人體內(nèi)的半衰期可長達(dá)6.2～18年，為最易在人體內(nèi)蓄積的毒性物質(zhì)。有研究證實(shí)，氯化鎘可攻擊機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)，產(chǎn)生氧化應(yīng)激，造成體內(nèi)ROS的累積，進(jìn)而引起脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、DNA鏈斷裂等。此外，鎘可以誘導(dǎo)許多早期應(yīng)激反應(yīng)基因異常表達(dá),而基因異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。鎘引起細(xì)胞凋亡也與鎘的毒性作用有關(guān)。
　　硫辛酸（

2、lipoic acid簡稱：LA），又名二硫辛酸，系統(tǒng)命名為1，2-二硫戊環(huán)-3-戊酸，分子式為C8H14O2S2，其相對分子質(zhì)量為206.33，是一種天然的二硫化物，它的負(fù)氧化還原電位為-290mV，在天然抗氧化劑中是最低的，故硫辛酸是天然抗氧化劑中效率較高的抗氧化劑。此外，因其兼具有水溶性和脂溶性，有時又被稱為“萬能抗氧化劑”。硫辛酸除具有一般抗氧化劑具有的特性外，如清除自由基、螯合金屬離子、修復(fù)DNA損傷等抗氧化功能；另外，LA還

3、具有實(shí)時在線再生其他抗氧化劑（如GSH、VC、VE）的功能。
　　本研究主要以氯化鎘染毒HepG2細(xì)胞產(chǎn)生氧化損傷模型，檢測硫辛酸對氯化鎘致HepG2細(xì)胞的細(xì)胞活力、ROS水平、MDA含量、DNA損傷以及GSH含量的影響，以期闡明硫辛酸的抗氧化作用。
　　一、硫辛酸對氯化鎘致HepG2細(xì)胞活力降低的影響
　　目的：探討不同濃度的硫辛酸對氯化鎘致HepG2細(xì)胞活力水平的影響。
　　方法：采用MTT試驗(yàn)來檢測細(xì)胞活力

4、。HepG2細(xì)胞先用不同濃度的硫辛酸（0.1mg/L、1mg/L、10mg/L）預(yù)處理8h，并在硫辛酸實(shí)時保護(hù)的條件下，25μmol/L氯化鎘處理16h后檢測其對細(xì)胞活力的影響。
　　結(jié)果：25μmol/L氯化鎘染毒HepG2細(xì)胞16h后，細(xì)胞活力下降至82.5％；10mg/L的硫辛酸組，細(xì)胞活力未發(fā)生顯著性變化（與正常對照相比，P>0.05）；與25μmol/L氯化鎘組相比較，預(yù)先在培養(yǎng)液中加入不同濃度硫辛酸（0.1mg/L、1

5、mg/L、10mg/L）后，HepG2細(xì)胞活力隨著硫辛酸濃度的增加而增強(qiáng)，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，P<0.05，P<0.05）。此外，氯化鎘-硫辛酸聯(lián)合作用組間，兩兩比較細(xì)胞活力有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05，P<0.05，P<0.05）。
　　結(jié)論：25μmol/L氯化鎘可降低HepG2細(xì)胞活力，而硫辛酸可拮抗此濃度氯化鎘所致的HepG2細(xì)胞活力的降低。
　　二、硫辛酸對氯化鎘致HepG2細(xì)胞內(nèi)ROS水平的影響

6、>　　目的：研究不同濃度硫辛酸對氯化鎘誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生ROS水平的影響。
　　方法：HepG2細(xì)胞先用不同濃度的硫辛酸（0.1mg/L、1mg/L、10mg/L）預(yù)處理8h，并在硫辛酸實(shí)時保護(hù)的條件下，氯化鎘染毒HepG2細(xì)胞產(chǎn)生ROS，以DCFH-DA作為熒光探針，采用多功能酶標(biāo)儀檢測氯化鎘、硫辛酸單獨(dú)與聯(lián)合作用下HepG2細(xì)胞內(nèi)ROS水平。
　　結(jié)果：25μmol/L氯化鎘作用HepG2細(xì)胞2h后，DCF熒光強(qiáng)度

7、較正常對照升高（P<0.05）；10mg/L的硫辛酸組，細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度較正常對照組略有降低，但并無顯著性差異（P>0.05）；不同濃度硫辛酸預(yù)處理后，熒光強(qiáng)度值降低，且隨著硫辛酸濃度增加，DCF熒光強(qiáng)度值呈降低趨勢；并且中劑量（1mg/L）和高劑量（10mg/L）硫辛酸-氯化鎘聯(lián)合作用組與低劑量（0.1mg/L）硫辛酸-氯化鎘聯(lián)合作用組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：硫辛酸能有效的減少胞內(nèi)ROS累積，對氯化鎘所

8、致HepG2細(xì)胞內(nèi)ROS水平的增高具有拮抗作用。
　　三、硫辛酸對氯化鎘致HepG2細(xì)胞內(nèi)MDA含量的影響
　　目的：探討不同濃度硫辛酸對氯化鎘染毒HepG2細(xì)胞內(nèi)MDA含量的影響。
　　方法：采用TBA法檢測不同處理因素下HepG2細(xì)胞內(nèi)MDA含量的變化。HepG2細(xì)胞先用不同濃度的硫辛酸（0.1mg/L、1mg/L、10mg/L）預(yù)處理8h，并在含有硫辛酸培養(yǎng)液中加入終濃度為25μmol/L氯化鎘，繼續(xù)培養(yǎng)16h，

9、多功能酶標(biāo)儀檢測其對MDA含量的影響。
　　結(jié)果：與正常對照相比，25μmol/L氯化鎘組MDA含量明顯增加（P<0.05）；10mg/L的硫辛酸組，細(xì)胞內(nèi)MDA含量較正常對照組有所降低，但并無顯著性差異（P>0.05）；不同濃度硫辛酸預(yù)處理后，隨著硫辛酸濃度增加，MDA含量逐漸降低。并且中劑量（1mg/L）和高劑量（10mg/L）硫辛酸-氯化鎘聯(lián)合作用組與低劑量（0.1mg/L）硫辛酸-氯化鎘聯(lián)合作用組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P

10、<0.05）。
　　結(jié)論：硫辛酸能降低脂質(zhì)過氧化物MDA含量，對氯化鎘所致HepG2細(xì)胞內(nèi)MDA含量的增高具有拮抗作用。
　　四、硫辛酸對氯化鎘致HepG2細(xì)胞內(nèi)DNA氧化損傷的影響
　　目的：研究不同濃度硫辛酸對氯化鎘誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞DNA氧化損傷的影響。
　　方法：HepG2細(xì)胞先用不同濃度的硫辛酸（0.1mg/L、1mg/L、10mg/L）預(yù)處理8h，并在含有硫辛酸培養(yǎng)液中加入終濃度為25μmol/L氯化

11、鎘，繼續(xù)培養(yǎng)4h。采用單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)，檢測硫辛酸對氯化鎘誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞內(nèi)DNA氧化損傷的影響。
　　結(jié)果：25μmol/L氯化鎘組Olive尾矩值較正常組明顯增加（P<0.05），說明此濃度氯化鎘可造成DNA損傷；不同濃度硫辛酸預(yù)處理后，Olive尾矩值降低，其降低幅度與硫辛酸濃度間呈依賴關(guān)系；不同濃度硫辛酸-氯化鎘聯(lián)合作用組，兩兩比較有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　結(jié)論：硫辛酸對氯化鎘所致HepG2細(xì)胞DNA氧

12、化損傷具有拮抗作用。
　　五、硫辛酸對氯化鎘染毒HepG2細(xì)胞內(nèi)GSH含量的初步研究
　　目的：初步探討硫辛酸對氯化鎘染毒HepG2細(xì)胞內(nèi)GSH含量的影響。
　　方法：HepG2細(xì)胞先用不同濃度的硫辛酸（0.1mg/L、1mg/L、10mg/L）預(yù)處理8h，并在含有硫辛酸培養(yǎng)液中加入終濃度為25μmol/L氯化鎘，繼續(xù)培養(yǎng)16h。采用DTNB法結(jié)合GSH和GSSG檢測試劑盒，檢測硫辛酸對氯化鎘染毒HepG2細(xì)胞內(nèi)GSH