腦缺血和細(xì)胞缺氧-復(fù)氧過程中JAK-STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因的表達(dá).pdf

1、目的：應(yīng)用大鼠腦缺血再灌注模型和細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型，研究JAK-STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因表達(dá)變化及藥物的作用。 方法：線栓法制備大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞模型，體外培養(yǎng)小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞株制備缺氧復(fù)氧模型，用SuperArray公司的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)發(fā)現(xiàn)者基因芯片和JAK-STAT信號(hào)途徑基因芯片來分析模型組和對(duì)照組基因表達(dá)的差異，并通過實(shí)時(shí)定量PCR方法對(duì)其中部分基因進(jìn)行驗(yàn)證。采用實(shí)時(shí)定量PCR方法分析藥物對(duì)細(xì)胞缺氧復(fù)氧后STAT2、STAT

2、5A、STAT5B、STAT6、SOCS4、PIAS2、PIAS3和PIAS4表達(dá)的影響。 結(jié)果：大鼠腦缺血2h再灌注24h缺血側(cè)海馬與正常側(cè)比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Jak-Stat信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路表達(dá)上調(diào)，Jak-Stat信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)基因上調(diào)的有STAT2、STAT5A、STAT5B和STAT6，下調(diào)的有JAK3；受體中上調(diào)的有MC-SF-R、Fcgr1、IFNAR1、IL-2Rg，下調(diào)的有EGFR和IFNAR2

3、；核因子及與STAT相互作用的因子中上調(diào)的有Mcmd5、Ncoa1、NF-κB1、Sfpi1、Sp1、Stub1，下調(diào)的有c-JUN、Smad5、c-src、Stam；STAT誘導(dǎo)表達(dá)的基因中上調(diào)的有Tnfrsf6(Fas)、Maf；JAK-STAT轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的副調(diào)控因子中上調(diào)的有PIAS2、Pias3、Pias4、Socs4，經(jīng)實(shí)時(shí)定量PCR方法驗(yàn)證，STAT2、STAT5A、STAT5B、STAT6、SOCS4、PIAS2、PIAS3

4、和PIAS4與芯片結(jié)果一致。小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞株缺氧4h復(fù)氧18h后與正常組比較，Jak-Stat信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)基因上調(diào)的有JAK1、Jak2、Tyk2、STAT1、STAT2、STAT4、STAT5A、STAT5B和STAT6；受體中上調(diào)的有prolactin受體、IL-2Rg，下調(diào)的有IL-4R；核因子及與STAT相互作用的因子中上調(diào)的有Mcmd5、Neoa1、NF-κb1、Sfpi1、Sp1、Stub1，下調(diào)的有Smad4；S

5、TAT誘導(dǎo)表達(dá)的基因中上調(diào)的有Tnfrsf6(Fas)、Maf、MMP3；JAK-STAT轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的副調(diào)控因子中上調(diào)的有PIAS2、Pias3、Pias4、Socs4。經(jīng)實(shí)時(shí)定量PCR方法驗(yàn)證，與在體實(shí)驗(yàn)相同的8種基因結(jié)果與芯片結(jié)果一致。在體與細(xì)胞模型JAK-STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因比較，大部分基因的變化是一致的。細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型中己酮可可堿中劑量可以刺激STAT2、STAT5A、STAT6、PIAS2、PIAS3的表達(dá)，而歐芹素乙無顯