HER2靶向相變型高分子超聲造影劑的制備及其對乳腺癌細(xì)胞的尋靶及抑制作用初步研究.pdf

1、第一部分HER2靶向相變型高分子超聲造影劑的制備及其特性研究
　　目的：制備一種新型相變型血管外靶向超聲造影劑——包裹液態(tài)氟碳的HER2靶向高分子納米球，并考察其理化性質(zhì)、相變能力及顯影效果。
　　方法：首先采用單乳化法制備包裹液態(tài)氟碳(PFH)的高分子PLGA納米球(PFH-PLGA)，然后通過碳二亞胺化學(xué)連接法將靶向HER2的特異性抗體曲妥珠單克隆抗體（trastuzumab）連接到納米球表面，制備成靶向納米球(PFH-

2、PLGA-tra);檢測其形態(tài)、粒徑、表面電位等一般性質(zhì);免疫熒光法及流式細(xì)胞術(shù)檢測trastuzumab與納米球連接情況;體外加熱法考察所包裹液態(tài)氟碳的相變情況;體外凝膠模型觀察納米球增強(qiáng)超聲顯影效果。
　　結(jié)果：靶向液態(tài)氟碳造影劑光鏡下呈球形，形態(tài)規(guī)則，大小均一，平均粒徑為(261±28)nm，平均表面電位為(-2.92±0.83) mv;免疫熒光法顯示，trastuzumab被成功地連接到了納米球上，流式細(xì)胞術(shù)顯示靶向造影劑

3、抗體連接率高達(dá)98.07％;體外熱相變實(shí)驗(yàn)示，較多納米球發(fā)生了液氣相變，成為粒徑較大的微泡;體外凝膠顯影實(shí)驗(yàn)示，靶向造影劑在高溫中（80攝氏度）的回聲灰階值較室溫中的灰階值明顯增強(qiáng)(P＜0.05)。
　　結(jié)論：通過單乳化法和碳二亞胺化學(xué)連接法成功制備了靶向HER2的液態(tài)氟碳高分子超聲造影劑，其粒徑較小，抗體連接率較高，具有相變潛能，有望成為HER2陽性腫瘤血管外顯影、治療的理想造影劑。
　　第二部分 HER2靶向相變型高分子

4、超聲造影劑對乳腺癌細(xì)胞的尋靶及抑制作用的初步研究
　　目的：制備HER2靶向新型相變型高分子超聲造影劑，評價(jià)其體外腫瘤細(xì)胞尋靶能力及對腫瘤細(xì)胞的抑制作用。
　　方法：采用單乳化法及碳二亞胺化學(xué)連接法制備HER2靶向相變型高分子超聲造影劑。體外培養(yǎng)經(jīng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HER2/neu質(zhì)粒的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞;體外尋靶實(shí)驗(yàn)觀察靶向造影劑與MCF-7細(xì)胞的結(jié)合情況，并用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行半定量分析;MTT法評價(jià)靶向超聲造影劑對人乳腺癌MCF

5、-7細(xì)胞增殖的抑制率的影響;流式細(xì)胞技術(shù)檢測靶向造影劑對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的凋亡率的影響。
　　結(jié)果：成功制備了靶向HER2的相變型高分子超聲造影劑;體外尋靶實(shí)驗(yàn)顯示，該靶向造影劑較多并且牢固的聚集在表達(dá)HER2的MCF-7細(xì)胞表面，對照組未見造影劑和MCF-7細(xì)胞的結(jié)合現(xiàn)象;流式細(xì)胞術(shù)顯示，靶向造影劑與MCF-7細(xì)胞的平均連接率高達(dá)（98.51±1.32）％，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于抗體封閉組和非靶向造影劑組;MTT法結(jié)果顯示靶向造影劑對乳

6、腺癌MCF-7細(xì)胞的12h、24h、48h的平均抑制率分別為（10.25±2.01）％、（17.96±1.64）％、（39.64±1.27）％，非靶向造影劑組對乳腺癌MCF-7細(xì)胞的12h、24h、48h的平均抑制率分別為（4.12±0.63）％、(5.81±0.58)％、（8.13±0.78）％，并且12h和24h靶向造影劑組抑制率均高于非靶向造影劑組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示靶向造影劑組對MCF-7細(xì)胞