人前列腺癌靶向超聲造影劑的制備及實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、前列腺癌(PCa)是西方國(guó)家最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，是美國(guó)男性癌癥死亡的第二大原因。近年來(lái)，我國(guó)前列腺癌的發(fā)病率也急劇上升。前列腺癌患者出現(xiàn)臨床癥狀就診時(shí)多已發(fā)生轉(zhuǎn)移，失去了治愈的機(jī)會(huì)，因此早期診斷對(duì)前列腺癌的治療與預(yù)后有重要的價(jià)值。目前所有的影像學(xué)檢查，都不能敏感地區(qū)分慢性前列腺炎、前列腺肥大與早期前列腺癌，其早期定性定位診斷仍然非常困難，仍依賴于有創(chuàng)的前列腺多點(diǎn)穿刺活檢。 超聲造影劑及相關(guān)技術(shù)的發(fā)展使人們對(duì)超聲造影在診斷前列腺

2、腫瘤中的作用有了更進(jìn)一步地了解，但目前用于前列腺腫瘤研究的超聲造影劑是一種無(wú)定向選擇作用的全身性造影劑。研究發(fā)現(xiàn)，前列腺特異性膜抗原((PSMA)是位于前列腺細(xì)胞膜上的一種糖蛋白，具有很高的前列腺組織特異性，在前列腺癌組織中呈明顯高表達(dá)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在前列腺癌組織中分布廣泛，在前列腺腫瘤新生血管的生成和維持方面具有重要作用?；谏鲜鲅芯砍晒覀?cè)O(shè)想分別以抗PSMA抗體和抗VEGF抗體為導(dǎo)向載體，制備人前列腺癌靶向超聲造

3、影劑并將其應(yīng)用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，則可使攜帶抗體的靶向造影劑能以較高的濃度聚集在荷瘤裸鼠前列腺腫瘤組織，達(dá)到特異性顯影的目的。 目的：分別以PSMA抗體或VEGF抗體作為配體，制備人前列腺癌靶向超聲造影劑，探討其體外尋靶能力；并探討該造影劑對(duì)荷人前列腺癌裸鼠的特異增強(qiáng)顯像效果，以期建立敏感的實(shí)驗(yàn)性前列腺癌超聲早期診斷方法。 方法：采用靜電吸附法將PSMA抗體和VEGF抗體分別與微泡造影劑結(jié)合，制備人前列腺癌靶向超聲造影劑；免疫熒

4、光染色實(shí)驗(yàn)證明抗體與微泡的結(jié)合以及PSMA蛋白在人前列腺癌細(xì)胞LNCaP和VEGF蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞ECV304上的表達(dá)；靶向結(jié)合實(shí)驗(yàn)探討靶向微泡的體外尋靶能力，以普通微泡作為對(duì)照；抗體阻斷實(shí)驗(yàn)檢測(cè)靶向微泡在體外與靶細(xì)胞結(jié)合的特異性。 人前列腺癌細(xì)胞株LNCaP體外無(wú)菌條件下培養(yǎng)傳代，BALB/c-nu雄性裸鼠皮下接種，建立荷人前列腺癌裸鼠動(dòng)物模型。經(jīng)荷瘤裸鼠尾靜脈分別推注普通造影劑、攜帶PSMA抗體和攜帶VEGF抗體的靶向造影

5、劑后低機(jī)械指數(shù)實(shí)時(shí)灰階顯像，觀察腫瘤自身前后實(shí)質(zhì)灰階變化，并測(cè)量其視頻強(qiáng)度，繪制時(shí)間-強(qiáng)度曲線，比較普通造影和靶向造影后腫瘤峰值強(qiáng)度和持續(xù)顯影時(shí)間。 荷瘤裸鼠隨機(jī)分成3組，每組8只。每組分別經(jīng)其尾靜脈推注普通造影劑、攜帶PSMA抗體和攜帶VEGF抗體的靶向造影劑，12min后采用能量多普勒成像，測(cè)量并計(jì)算腫瘤截面內(nèi)血流信號(hào)所占的面積比(bloodflowarearatio，BFAR)，分析比較普通造影劑和靶向造影劑對(duì)前列腺腫瘤組

6、織能量多普勒信號(hào)的增強(qiáng)效果。 結(jié)果：攜帶PSMA抗體和攜帶VEGF抗體的靶向微泡以及人前列腺癌細(xì)胞LNCaP和血管內(nèi)皮細(xì)胞ECV304的免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。靶向結(jié)合實(shí)驗(yàn)顯示，攜帶PSMA抗體和攜帶VEGF抗體的靶向微泡能分別較好地粘附在人前列腺癌細(xì)胞LNCaP和血管內(nèi)皮細(xì)胞ECV304的周?chē)?，而?duì)照組未見(jiàn)普通微泡與細(xì)胞結(jié)合?？贵w阻斷實(shí)驗(yàn)證明了攜帶PSMA抗體和攜帶VEGF抗體的靶向微泡分別與人前列腺癌細(xì)胞LNCaP和血管

7、內(nèi)皮細(xì)胞ECV304結(jié)合的特異性。 成功建立了荷人前列腺癌裸鼠動(dòng)物模型。經(jīng)荷瘤裸鼠尾靜脈推注普通造影劑、攜帶PSMA抗體和攜帶VEGF抗體的靶向造影劑后低機(jī)械指數(shù)灰階成像(MI0.05)對(duì)比觀察，三者之間腫瘤實(shí)質(zhì)的峰值強(qiáng)度、持續(xù)顯影時(shí)間無(wú)顯著差異(P＞0.05)。推注攜帶VEGF抗體的靶向造影劑12分鐘后能量多普勒成像(MI1.4)，可見(jiàn)前列腺腫瘤組織能量多普勒信號(hào)顯著增強(qiáng)，與普通造影劑和攜帶PSMA抗體的靶向造影劑相比較其BF

8、AR值顯著升高(P＜0.01)。 結(jié)論：采用靜電吸附法可成功地將PSMA抗體和VEGF抗體分別結(jié)合到微泡造影劑表面；結(jié)合了PSMA抗體和VEGF抗體的靶向微泡在體外能分別與人前列腺癌細(xì)胞LNCaP和人血管內(nèi)皮細(xì)胞ECV304有效特異地結(jié)合。 攜帶VEGF抗體的靶向造影劑在體內(nèi)可以有效特異性地與前列腺腫瘤新生血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合，可作為診斷前列腺癌的靶向超聲造影劑。能量多普勒延遲顯像能有效顯示靶向造影后腫瘤組織內(nèi)的能量多普勒增