一種基于聚集誘導(dǎo)發(fā)光原理的SIRT1探針設(shè)計及其在中藥藥效物質(zhì)篩選中的應(yīng)用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、SIRT1(Sirtuins1)是煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依賴的組蛋白去乙?;?,通過對組蛋白及多種非組蛋白底物的去乙?;揎?,參與基因表達調(diào)控、細胞凋亡、分化等諸多生理過程。SIRT1激動劑在心血管疾病及糖尿病等代謝綜合癥中有潛在的應(yīng)用前景,而SIRT1抑制劑目前可用于腫瘤治療。以白藜蘆醇為代表的天然SIRT1激動劑近年來引起了學(xué)界的極大關(guān)注,而從中藥中篩選發(fā)現(xiàn)SIRT1激動劑的技術(shù)方法及應(yīng)用實例還少見報道。
  本文

2、基于聚集誘導(dǎo)發(fā)光(Aggregation-Induced Emission,AIE)原理,設(shè)計了一種新型熒光探針用于SIRT1活性檢測。并應(yīng)用該探針,實現(xiàn)了活細胞中SIRT1活性檢測和中藥化合物庫中SIRT1激動劑/抑制劑的同時篩選。
  主要研究成果如下:
  1.基于AIE原理,制備了含一個羧基的TPE衍生物作為熒光生色團,制備了肽段Gly-Lys(Ac)-Try-Asp-Asp作為SIRT1酶催化的底物,通過固相合成連

3、接構(gòu)成了檢測SIRT1的新型、靈敏、專一性的熒光探針。對熒光探針的“開-關(guān)”效應(yīng)及其用于SIRT1蛋白活性檢測的方法學(xué)進行了研究。結(jié)果表明,熒光探針具有良好的靈敏度、線性范圍和特異性,可用于特異性檢測SIRT1蛋白活性。
  2.構(gòu)建了基于熒光探針的體外SIRT1活性檢測方法與活細胞中SIRT1活性檢測方法,應(yīng)用于SIRT1激動劑與抑制劑篩選。對195個中藥化合物進行SIRT1調(diào)節(jié)劑的篩選,并對篩選到的化合物進行了量效驗證。結(jié)果表

4、明,熒光探針不僅可以實現(xiàn)體外SIRT1蛋白抑制劑和激動劑的雙重篩選,也可以實現(xiàn)基于活細胞成像的SIRT1調(diào)節(jié)劑篩選。從中藥化合物庫中篩選到了19個SIRT1激動劑,大部分來自于具有補益作用的人參、麥冬以及收澀作用的五味子。
  3.運用細胞內(nèi)SIRT1活性檢測方法和表面離子共振(SPR)技術(shù)對篩選到的4個SIRT1激動劑進行了SIRT1蛋白激動作用的驗證,并對人參皂苷Rb2、人參皂苷Rc、人參皂苷F1、五味子甲素等4個SIRT1激

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