三種生物活性篩選模型的引建及其在天然產(chǎn)物篩選中的應(yīng)用.pdf

1、本論文主要由四章組成。第一章主要介紹了抗腫瘤活性篩選模型CCLT的引建及其在化合物樣品批量篩選和中甸鳳仙的活性追蹤分離中的應(yīng)用。第二章主要介紹了抗骨質(zhì)疏松活性篩選模型CA-Ⅱ模型在天然植物樣品篩選中的應(yīng)用。第三章主要介紹了抗真菌活性篩選模型YNG在天然植物樣品篩選中的應(yīng)用。第四章主要綜述了近年來抗骨質(zhì)疏松藥物篩選方法的一些進展。共計篩選了7589個樣品（化合物3005個，提取物4584個），發(fā)現(xiàn)了354個活性樣品（化合物97個，提取物2

2、57個）。其中抗腫瘤活性樣品87個，抗骨質(zhì)疏松活性樣品100個，抗真菌活性樣品167個。特別是8個化合物樣品具有較強的抗腫瘤活性（IC50<2.5μg/ml），4個提取物或分離部位樣品具有較強的抗骨質(zhì)疏松活性（IC50<2.5μg/ml），1個化合物樣品和2個提取物或分離部位樣品具有較強的抗真菌活性（IC50<2μg/ml）。 論文還對這些活性樣品的結(jié)構(gòu)和活性、來源與活性的關(guān)系進行了探討。這些研究為活性化合物的進一步藥效研究和活

3、性提取物或分離部位的活性追蹤分離提供了重要依據(jù)。 同時中甸鳳仙經(jīng)CCLT的模型活性檢測指導(dǎo)下的分離，很快發(fā)現(xiàn)了主要的抗腫瘤活性成分200211202（IC50=9.57μM），活性較強，有潛在研發(fā)價值。 通過以上工作發(fā)現(xiàn)這三個體外篩選模型CCLT、CA-Ⅱ、YNG具有快速、微量、簡便、高效、穩(wěn)定等優(yōu)點，特別適合于樣品的批量篩選。下面簡要介紹各章內(nèi)容： 第一章 抗腫瘤活性篩選模型CCLT的引建及其應(yīng)用 C

4、CLT模型是通過腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)進行藥物細(xì)胞毒性檢測篩選抗腫瘤藥物的方法。我們主要通過人非小細(xì)胞性肺癌細(xì)胞株A549培養(yǎng)，對1571個植物來源的化合物樣品進行細(xì)胞毒性檢測，希望能夠發(fā)現(xiàn)對該細(xì)胞生長有較好抑制作用的化合物；并對中甸鳳仙的各個提取或分離部位進行細(xì)胞毒性檢測，以此指導(dǎo)各步分離工作，希望能從該植物提取物中尋找到抗癌作用較好的成分。 我們參照美國NCI和中科院上海藥物研究所的抗腫瘤細(xì)胞毒性模型篩選方法，經(jīng)過一系列的條件優(yōu)化，建

5、立了CCLT模型，并對1571個植物來源的化合物樣品進行了批量篩選。經(jīng)過初篩后選取抑制率最高的前92個樣品進行了評估；經(jīng)過評估后，共發(fā)現(xiàn)82個活性化合物（IC50值低于10μg/ml），其中活性較好的3個化合物的IC50值小于1μg/ml，IC50值介于1-2.5μg/ml之間的樣品5個，介于2.5-5μg/ml之間的樣品有59個，介于5-7.5μg/ml之間的樣品共10個，介于7.5-10μg/ml之間的樣品共5個，并對這些活性化合物

6、進行了結(jié)構(gòu)與活性的分析。 在對中甸鳳仙的活性追蹤分離過程中，對其粗提取、不同溶劑萃取部位和柱分離部位分離及其得到的成分共計36個樣品進行了A549細(xì)胞株的抗腫瘤活性檢測，發(fā)現(xiàn)了8個抗腫瘤活性樣品，其中包括了抗腫瘤活性最強的化合物200211202，其IC50值為9.57μM。 第二章 抗骨質(zhì)疏松活性篩選模型CA-Ⅱ的批量篩選 CA-Ⅱ模型是以破骨細(xì)胞內(nèi)含量豐富且對骨吸收起重要作用的碳酸酐酶Ⅱ作為靶點的體外篩選方

7、法。我們希望通過尋找該酶的抑制劑來尋找治療骨質(zhì)疏松癥的藥物。該實驗以樣品對該酶催化其底物PNPA的酯鍵水解程度的影響來評價樣品對該酶的抑制或促進作用。在進一步條件優(yōu)化的基礎(chǔ)上對主要來源于植物的天然產(chǎn)物樣品進行了批量篩選，包括2840個提取物或分離部位樣品及243個化合物樣品，經(jīng)過初篩、復(fù)篩和評估，共發(fā)現(xiàn)了96個提取物或分離部位樣品的IC50值低于10mg/ml，4個化合物樣品的IC50值低于12.5mg/ml，并探討了這些活性樣品的結(jié)構(gòu)

8、與活性、來源與活性的關(guān)系。 第三章 抗真菌活性篩選模型YNG的批量篩選 YNG模型是對常見的三種具有代表性的條件致病菌即白色念珠菌、光滑念珠菌和煙熏曲霉菌在藥物存在下培養(yǎng)并檢測樣品對真菌的抑制程度來篩選抗真菌藥物的方法。我們希望通過篩選能找到對這三種條件致病真菌生長產(chǎn)生抑制作用的樣品。我們對這幾種致病菌在一定時間內(nèi)與藥物一同培養(yǎng)，通過直接比濁或間接觀察細(xì)胞對染料的分解程度來檢測這些真菌生長狀況，評價樣品的抗真菌活性。

9、 通過對這些真菌的培養(yǎng)，在CA-YNG模型中對329個提取物、242個化合物進行了篩選，在CA-BSA-YNG模型中對329個提取物、246個化合物進行了篩選，在CG-YNG模型中對732個提取物、462個化合物進行了篩選，在AF-YNG模型中對329個提取物、241個化合物進行了篩選，累計篩選了2910個樣品。發(fā)現(xiàn)了對CA菌株具有抑制活性的樣品9個，其中6個提取物（IC50<16μg/ml）、3個化合物（IC50<4μg/ml）

10、；對CG菌株具有抑制活性樣品共158個，其中150個提取物（IC50<16μg/ml）、8個化合物（IC50<4μg/ml），對BSA存在下CA菌株未發(fā)現(xiàn)具有抑制活性的樣品，對AF菌株也未發(fā)現(xiàn)具有抑制活性的樣品，共發(fā)現(xiàn)有活性的樣品167個，其中11個化合物、156個提取物。并對這些活性樣品的結(jié)構(gòu)與活性、來源與活性進行了分析。 第四章 抗骨質(zhì)疏松藥物活性篩選方法進展 本章綜述了抗骨質(zhì)疏松藥物活性篩選方法在整體和離體動物模