體外篩選具黃嘌呤氧化酶抑制活性的天然產物.pdf

1、近年來，隨著人們生活水平的不斷提高，痛風的發(fā)病率也呈逐漸上升趨勢。痛風是由于體內嘌呤代謝紊亂，產生尿酸過多或尿酸排泄過少而導致血中尿酸升高，尿酸鹽結晶沉積在組織中引起的反復發(fā)作性炎癥疾病。臨床上治療痛風的方法主要包括促進尿酸排泄和抑制尿酸生成。其中，通過抑制黃嘌呤氧化酶活性減少尿酸的生成被認為是治療痛風的最有效的方法之一。體內次黃嘌呤可在黃嘌呤氧化酶的催化下生成黃嘌呤，進一步生成尿酸，故抑制黃嘌呤氧化酶的活性可顯著降低尿酸的生成。目前臨

2、床應用的抗痛風藥物的不良反應越來越突出，人們開始傾向于從天然產物中篩選具有抗痛風活性的化學成分。我國中藥資源豐富、中藥的化學成分結構多樣，作用靶點眾多，因此從中藥中篩選高效、低毒的黃嘌呤氧化酶抑制劑具有良好的應用前景。
　　黃嘌呤氧化酶抑制劑的體外篩選方法包括紫外分光光度法、電化學法、超高效液相色譜法等，但都存在不同的缺點，因此，本課題擬基于高效液相色譜（HPLC）建立一種簡單、快捷、準確的體外篩選方法，并利用建立的方法篩選中藥及

3、天然產物中具有黃嘌呤氧化酶抑制活性的先導化合物，為抗痛風新藥的研究提供理論依據(jù)。
　　目的：建立基于HPLC體外篩選黃嘌呤氧化酶抑制劑的新方法；利用該方法考察具有抗痛風活性中藥的黃嘌呤氧化酶抑制活性；選擇活性最好的中藥作為研究對象進行活性追蹤分離，以期獲得活性較好的先導化合物。
　　方法：通過HPLC測定酶促反應體系中底物黃嘌呤在反應前后含量的變化，建立體外篩選黃嘌呤氧化酶抑制劑的方法。色譜條件如下：Agilent SB-C

4、18柱，4.6 mm?250 mm，5?m；流動相，0.02 mol·L-1 KH2PO4（含甲醇1％）；流速，1.0 mL·min-1；進樣量，20?柱溫，室溫；檢測波長，254 nm。利用建立的方法對文獻報道具有抗痛風活性的14味中藥，即蘇木、海桐皮、牡丹皮、秦皮、虎杖、威靈仙、玉米須、土茯苓、金錢草，使君子、葛花、秦艽、高良姜和樗白皮進行了黃嘌呤氧化酶抑制活性的考察，并對其中抑制活性最好的中藥牡丹皮在活性追蹤指導下進行了化學成分研

5、究，結合質譜和核磁數(shù)據(jù)，對得到的單體化合物的結構進行了鑒定，并對其黃嘌呤氧化酶抑制活性進行了考察。
　　結果：基于HPLC體外篩選黃嘌呤氧化酶抑制劑的方法線性關系良好，精密度、穩(wěn)定性、重復性、回收率結果均符合方法學考察的要求。利用該方法對14味中藥進行篩選，發(fā)現(xiàn)使君子、蘇木、虎杖和牡丹皮四味中藥70%乙醇提取物的酶抑制作用較強，其IC50分別為10.04、8.02、2.06和1.36 mg·mL-1。對活性最好的中藥牡丹皮進行活性

6、成分追蹤，從其乙酸乙酯和正丁醇部位分得15個化合物，分別鑒定為沒食子酸（1），沒食子酸甲酯（2），沒食子酸乙酯（3），槲皮素（4），兒茶素（5），胡蘿卜苷（6），芍藥苷（7），牡丹苷 D（8），4-O-甲基氧化芍藥苷（9），沒食子酰氧化芍藥苷（10），丹皮酚（11），丹皮酚原苷（12），沒食子酰氧化芍藥苷 B（13），丹皮酚新苷（14）和沒食子氧化芍藥苷D（15）。進一步活性篩選發(fā)現(xiàn)，化合物1-5，10，13和15具有黃嘌呤氧化酶抑制活

7、性，其中化合物1-3，10，13和15活性較強，其IC50分別為2.04，1.91，3.60，0.75，1.28，0.97 mmol·L-1。此外，針對活性較好的蘇木，對前期本課題組分離得到的24個單體化合物進行活性篩選，發(fā)現(xiàn)化合物7,3',4'-三羥基-3-芐基-2氫-苯并吡喃，3-去氧蘇木酮B，蘇木查爾酮和原蘇木素A具有一定的活性。
　　結論：基于 HPLC法體外篩選黃嘌呤氧化酶抑制劑的方法操作簡單、快速、可靠且易推廣，為黃嘌