七種卷柏屬藥用植物抑制黃嘌呤氧化酶、脂氧化酶和環(huán)氧化酶的活性作用研究.pdf

1、黃嘌呤氧化酶(XOD)、脂氧化酶(LOX)和環(huán)氧化酶(COX)是人體中涉及氧化過程的幾種重要的氧化酶，這些酶的高度表達(dá)，與自由基產(chǎn)生和炎癥、硬化、心血管疾病、衰老、癌癥等病理過程密切相關(guān)．這幾種酶的抑制劑對(duì)于清除自由基、減少炎癥、促進(jìn)組織修復(fù)、控制一些疾病(如癌癥、病毒性疾病)的發(fā)展具有重要意義。 我國(guó)卷柏屬(Selaginella)植物有60-70種，湖北省的卷柏屬藥用植物共有14種，廣泛用于治療癌癥、病毒性肝炎等多種疾?。?/p>

2、理研究證實(shí)，卷柏屬藥用植物具有廣泛的藥理活性，尤其在抗腫瘤、抗病毒、降血糖、抑菌與抗炎方面的功能較為顯著。并且本屬植物普遍含有穗花杉雙黃酮等多種雙黃酮類抗腫瘤活性成分，還發(fā)現(xiàn)具有抗病毒作用的活性成分。為此，對(duì)7種卷柏屬藥用植物進(jìn)行了黃嘌呤氧化酶、脂氧化酶抑制劑的篩選研究和和下調(diào)環(huán)氧化酶-2mRNA作用的活性物質(zhì)研究，并進(jìn)一步進(jìn)行了抗腫瘤、抗病毒作用的實(shí)驗(yàn)研究，為尋找研制新的抗腫瘤、抗病毒的輔助治療藥物，提供依據(jù)． 用帶有酶動(dòng)力學(xué)

3、分析軟件的紫外分光光度計(jì)，檢測(cè)7種卷柏屬藥用植物的28種提取物、3種總黃酮、8種單體化合物和12個(gè)流分在體外對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的影響．結(jié)果顯示乙酸乙酯提取物和95％乙醇提取物是抑制XOD的活性部位。3種總黃酮(翠云草總黃酮、江南卷柏總黃酮、細(xì)葉卷柏總黃酮)和3種化合物(羅波斯塔雙黃酮、2,3-二氫-3’，3”’-雙芹菜素和2”，3”-二氫-5,5”，7，7”，4’-五羥基-[3’-0-4”’]-雙黃酮)對(duì)XOD的抑制作用較強(qiáng)．其中羅波斯

4、塔雙黃酮抑制XOD活性的作用最強(qiáng)，與陽(yáng)性對(duì)照品槲皮素相近。實(shí)驗(yàn)還表明，墊狀卷柏甲醇部位10個(gè)流分(Fr1～Fr10)中，F(xiàn)r5對(duì)XOD的抑制活性最強(qiáng)。繼續(xù)將Fr5分離純化，則活性降低．說(shuō)明墊狀卷柏雙黃酮成分的抗氧化活性不僅體現(xiàn)于單一成分，還體現(xiàn)在它們的整體效應(yīng)。 運(yùn)用脂氧化酶體外抑制實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)7種卷柏屬藥用植物的28種提取物、12種單體化合物和3個(gè)組分對(duì)脂氧化酶活性的影響。結(jié)果顯示乙酸乙酯提取物和95％乙醇提取物(薄葉卷柏除外)

5、是主要活性部位。有6種單體化合物對(duì)LOX顯示較強(qiáng)的抑制活性，強(qiáng)弱順序?yàn)椋菏ゲ莘?、穗花衫雙黃酮、羅波斯塔雙黃酮、羅波斯塔雙黃酮-4’-甲醚、2”，3”-二氫-5,5”，7,7”，4’-五羥基-[3’-0-4”’]-雙黃酮、2,3-二氫-3’，3”’-雙芹菜素。 采用RT-PCR技術(shù)，測(cè)定從細(xì)葉卷柏提取的5種化合物對(duì)HT-29細(xì)胞中COX-2mRNA表達(dá)的影響。結(jié)果表明：這5種化合物的灰度值分別與其樣品終濃度呈負(fù)相關(guān)．說(shuō)明穗花杉雙黃

6、酮、羅波斯塔雙黃酮-4’-甲醚、2”，3”-二氫-5，5”，7，7”，4’-五羥基-6，6”-二甲基-[3’-0-4”’]-雙黃酮、2”，3”-二氫-5，5”，7，7”，4”’-五羥基-6，6”-二甲基-[4’-0-3”’]-雙黃酮和2”，3”-二氫-5，5”，7，7”，4’-五羥基-[3’-0-4”’]-雙黃酮這5種化合物，均可在mRNA水平抑制結(jié)腸癌細(xì)胞COX-2的表達(dá)。 采用噻唑藍(lán)(MTT)法，觀察從細(xì)葉卷柏提取的4種化合

7、物對(duì)體外培養(yǎng)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果表明羅波斯塔雙黃酮-4’-甲醚、穗花衫雙黃酮、2”，3”-二氫．5，5”，7，7”，4’-五羥基-6,6”-二甲基-[3’-0-4”’]-雙黃酮和2”，3”-二氫-5，5”，7，7”，4”’-五羥基-6，6”-二甲基-[4’-0-3”’]．雙黃酮對(duì)HT-29細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖具有明顯抑制作用，濃度在12.5μg/mL~100μg/mL時(shí)，其作用有量效關(guān)系。 采用卷柏屬藥用植物的13種提

8、取物培養(yǎng)CVB，感染的Hep-2細(xì)胞，觀察比較細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)，72h后MTT法測(cè)定細(xì)胞活性，采用治療指數(shù)(TI=TC50/IC50)作為評(píng)價(jià)指標(biāo)來(lái)衡量藥物對(duì)CVB3的抑制效力。結(jié)果為薄葉卷柏，蔬葉卷柏、江南卷柏這3種卷柏的乙酸乙脂提取物和95％乙醇提取物、墊狀卷柏95％乙醇提取物、細(xì)葉卷柏水提物對(duì)CVB，病毒具有殺滅或抑制作用，翠云草對(duì)病毒沒有作用。 本研究還表明，乙酸乙酯提取物和95％乙醇提取物是卷柏屬藥用藥物抑制黃嘌

9、呤氧化酶和脂氧化酶的活性部位。有1種化合物2”，3”-二氫-5，5”，7，7”，4’-五羥基-[3，-0-4”’]-雙黃酮對(duì)黃嘌呤氧化酶、脂氧化酶和環(huán)氧化酶這3種酶均具有抑制作用。有2種化合物羅波斯塔雙黃酮和2，3-二氫-3’，3”’-雙芹菜素對(duì)黃嘌呤氧化酶和脂氧化酶均具有明顯抑制作用；有4種化合物穗花衫雙黃酮、羅波斯塔雙黃酮-4’-甲醚、2”，3”-二氫．5，5”，7，7”，4’-五羥基-6，6”-二甲基-[3’-0-4”’]-雙黃酮